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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pET-28a琼脂糖凝胶电泳这样的结果，是什么原因？
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] pET-28a琼脂糖凝胶电泳这样的结果，是什么原因？ 已有3人参与

提取的质粒pET-28a的质粒，琼脂糖凝胶电泳的结果如图所示。左边是4500的marker，最右边是10000的marker，最亮的那条带是5000bp。
   以前没做过质粒，检测结果这样，正常么？
   求各位虫友不惜赐教！

pET-28a琼脂糖凝胶电泳这样的结果，是什么原因？
UVP00213Jan222015_副本.jpg
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
1楼 2015-01-25 21:20:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:43
楼上的你家质粒跑出来是这样？明显是提的不行吗，都没有主带啊，或者是你叫配的不行，我们都是跑的但一条带或者有两条带
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3楼2015-01-25 22:41:29
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普通回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)
质粒大小是多少？条带挺正常的，质粒跑出来都是差不多这样

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-01-25 22:31:59
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shengchen

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:57
质粒理论上跑出有三条带，分别是超螺旋，缺刻和线性。其中超螺旋一般浓度最高，而线性的应该和你的理论长度一致。通常可能只见到超螺旋的带，或者见到超螺旋和缺刻的，而见不到线性的。楼主你自己分析看看吧。
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凡人皆有一死，凡人必须侍奉
4楼2015-01-25 23:18:24
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-25 22:41:29
楼上的你家质粒跑出来是这样？明显是提的不行吗，都没有主带啊，或者是你叫配的不行，我们都是跑的但一条带或者有两条带

我提出来的质粒如果不做稀释直接跑，就会出现跟他差不多的样子，但稀释一下就会比较好，一般两个条带，前面一条亮，后面一条会比较暗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-01-25 23:39:26
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuwukang at 2015-01-25 22:31:59
质粒大小是多少？条带挺正常的，质粒跑出来都是差不多这样

5300bp左右，正常么？
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
6楼2015-01-26 08:31:31
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuwukang at 2015-01-25 23:39:26
我提出来的质粒如果不做稀释直接跑，就会出现跟他差不多的样子，但稀释一下就会比较好，一般两个条带，前面一条亮，后面一条会比较暗
...

一般稀释多少倍呢？是不是后面的一条带才是跟实际大小差不多大的
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7楼2015-01-26 08:32:48
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
4楼: Originally posted by shengchen at 2015-01-25 23:18:24
质粒理论上跑出有三条带，分别是超螺旋，缺刻和线性。其中超螺旋一般浓度最高，而线性的应该和你的理论长度一致。通常可能只见到超螺旋的带，或者见到超螺旋和缺刻的，而见不到线性的。楼主你自己分析看看吧。

那缺刻的呢？我感觉能隐隐约约看到三条带，第一条和第三条比较浅，中间一条很亮，但是第三条的大小跟理论长度差不多，这样看来的话就比较正常了？
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
8楼2015-01-26 08:35:05
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liuyuchang06

至尊木虫 (文坛精英)

博士

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正常的，我也遇到过，酶切后任然可以连目的片段
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9楼2015-01-26 08:56:28
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-01-26 08:32:48
一般稀释多少倍呢？是不是后面的一条带才是跟实际大小差不多大的...

你这个10000的marker跑的有点问题吧，但是跟4500的marker比5300是差不多的，我一般稀释个3到4倍吧，看提出来浓度多少，我都是两条带，即使有三条那一条我也没看见可能太淡了

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10楼2015-01-26 09:37:30
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