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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » HPLC两个峰分不开，梯度洗脱已经是100的高纯水了
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小小小糖豆

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC两个峰分不开，梯度洗脱已经是100的高纯水了 已有7人参与

液相条件：c18柱，流动相A：1%冰醋酸水；B：1%冰醋酸甲醇
图谱如图，1号峰初步认定为没食子酸，推测2、3号峰也为酚酸类，但此时流动相已经是100%的水了，怎么使2、3号峰能够分开。试过用纯水不用酸水跑，依旧没有分开，并且峰型不如酸水好

HPLC两个峰分不开，梯度洗脱已经是100的高纯水了
Screenshot_2015-01-15-09-02-26.png
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1楼 2015-01-15 09:18:08
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
明显已经分开了，只是中间的基线陡然升高，应该关注如何让基线回落到正常水平。建议贴上梯度条件!
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归零
2楼2015-01-15 10:09:11
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longyi706565

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基线抬高，很有可能物质2和3相互转化，可能是2或3在你所在的色谱系统中极不稳定，个人觉得还是做下LC/MS比较好。
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3楼2015-01-15 13:17:41
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小小小糖豆

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2015-01-15 10:09:11
明显已经分开了，只是中间的基线陡然升高，应该关注如何让基线回落到正常水平。建议贴上梯度条件!

梯度条件，A：1%冰醋酸水；B：1%冰醋酸甲醇
0min    0%B;
15min   5%B;
45min   10%B；
75min   15%B;
80min   30%B;
90min   50%B;
100min   5%B;
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4楼2015-01-15 15:47:13
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gwmgyp

版主 (知名作家)

搬砖将

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
啥样的柱子,能受得了1%的醋酸,测测PH,是多少了,另问一下检测波长是不是末端吸收,末端吸收的样品有宜用冰醋酸的,会引起基线噪声高,走针溶剂空白,也这样么?
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gwmgyp
5楼2015-01-15 15:59:38
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咕噜噜噜

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人愚见，有可能是三个待测成分没有和其他杂质分离，所以基线上去了，而不是梯度突然变快，建议换改变流动相种类及配比或者换根柱子再试试
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Hope is a good thing.
6楼2015-01-15 16:29:04
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torekill

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目测是你的波长没选好，选个高一点的波长中间那个平台应该就看不见了
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7楼2015-01-15 17:14:40
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dcmyt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况我也遇到过，应该不是没分开，感觉像峰型不好，但是什么改善剂都没效果，最后我加了2%乙腈就好了。。当然也不排除是梯度产生的。
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8楼2015-01-15 17:56:41
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药剂天下ing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议1）请说明检测波长如何，1%的酸对色谱柱也是不利的，建议0.1～-0.5%为宜；2）换色谱柱，应换亲水材料的柱子，可以试试SB-Aq等
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9楼2015-01-16 14:03:45
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