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1楼2013-02-19 11:39:45

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ruiyi1101

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
456895: 金币+30, ★★★很有帮助, 你这个是HPLC的我想问UPLC的B相你知道怎么配吗 2013-02-26 11:45:00

Waters AccQ-Tag流动相配制（A液）
稀磷酸：取100ml浓磷酸加水到100ml高纯水中；
EDTA溶液：称取100mg EDTA二钠盐，加100ml MilliQ水，超声振荡使其溶解；
流动相A（140mM乙酸钠，17mM三乙胺，稀磷酸调节pH=5.02）：
1. 称19.04g三水乙酸钠；
2. 加1000ml MilliQ水，搅拌溶解；
3. 用稀磷酸将pH调至5.2；
4. 加入1ml EDTA溶液；
5. 加入0.1g叠代化钠（主要防止流动相中长霉菌）；
6. 加入2.37ml三乙胺（约1.72g）；
7. 用稀磷酸调节pH至5.02；
8. 用水溶性过滤器过滤，备用。

这个流动相A配制的关键点是最终的pH=5.02，这个会影响氨基酸的分离效果，所以楼主的pH计需要计量校验合格、每次配制流动相时需要用标准缓冲液校正pH计，配制的流动相需要用含有17中氨基酸的标准品溶液衍生化，测试一下分离效果确保同商品化销售的流动相A的效果一致，如果分离度不佳，适当调节pH值。

出现这种情况的原因是楼主调的pH=5.02严格上讲并不完全等于Waters公司销售的流动相A的pH=5.02，这个分离对流动相的pH控制是十分苛刻的，祝你好运！