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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 超高效液相AccQ-Tag法测定氨基酸含量所用到的流动相的组成
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456895

禁虫 (正式写手)
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1楼 2013-02-19 11:39:45
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ruiyi1101

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
456895: 金币+30, ★★★很有帮助, 你这个是HPLC的我想问UPLC的B相你知道怎么配吗 2013-02-26 11:45:00
Waters AccQ-Tag流动相配制（A液）
稀磷酸：取100ml浓磷酸加水到100ml高纯水中；
EDTA溶液：称取100mg EDTA二钠盐，加100ml MilliQ水，超声振荡使其溶解；
流动相A（140mM乙酸钠，17mM三乙胺，稀磷酸调节pH=5.02）：
1. 称19.04g三水乙酸钠；
2. 加1000ml MilliQ水，搅拌溶解；
3. 用稀磷酸将pH调至5.2；
4. 加入1ml EDTA溶液；
5. 加入0.1g叠代化钠（主要防止流动相中长霉菌）；
6. 加入2.37ml三乙胺（约1.72g）；
7. 用稀磷酸调节pH至5.02；
8. 用水溶性过滤器过滤，备用。

这个流动相A配制的关键点是最终的pH=5.02，这个会影响氨基酸的分离效果，所以楼主的pH计需要计量校验合格、每次配制流动相时需要用标准缓冲液校正pH计，配制的流动相需要用含有17中氨基酸的标准品溶液衍生化，测试一下分离效果确保同商品化销售的流动相A的效果一致，如果分离度不佳，适当调节pH值。

出现这种情况的原因是楼主调的pH=5.02严格上讲并不完全等于Waters公司销售的流动相A的pH=5.02，这个分离对流动相的pH控制是十分苛刻的，祝你好运！
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2楼2013-02-19 13:59:56
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flv1966

铁杆木虫 (正式写手)

头疼

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上这解释太专业了把，受益匪浅
赞一下 回复此楼
中国有风险，投胎需谨慎！~~~~~~
3楼2013-02-19 14:46:30
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456895

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-02-26 11:45:54
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ruiyi1101

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
456895: 金币+20, ★★★很有帮助, 应该是UPLC吧，HPLC的AccQ.Tag使用手册上应该是60%乙腈 2013-02-28 17:19:44
waters在用于HPLC的AccQ.Tag使用手册上描述稀释液B是100%纯乙腈。
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5楼2013-02-27 09:29:16
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凌筱禾·无心

银虫 (正式写手)
楼主能给说说，你测氨基酸具体用的色谱条件吗？
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不要再打酱油啦，加油加油加油!
6楼2014-01-19 09:38:05
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