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456895

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ruiyi1101

新虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
456895: 金币+30, ★★★很有帮助, 你这个是HPLC的我想问UPLC的B相你知道怎么配吗 2013-02-26 11:45:00
Waters AccQ-Tag流动相配制(A液)
稀磷酸:取100ml浓磷酸加水到100ml高纯水中;
EDTA溶液:称取100mg EDTA二钠盐,加100ml MilliQ水,超声振荡使其溶解;
流动相A(140mM乙酸钠,17mM三乙胺,稀磷酸调节pH=5.02):
1. 称19.04g三水乙酸钠;
2. 加1000ml MilliQ水,搅拌溶解;
3. 用稀磷酸将pH调至5.2;
4. 加入1ml EDTA溶液;
5. 加入0.1g叠代化钠(主要防止流动相中长霉菌);
6. 加入2.37ml三乙胺(约1.72g);
7. 用稀磷酸调节pH至5.02;
8. 用水溶性过滤器过滤,备用。

这个流动相A配制的关键点是最终的pH=5.02,这个会影响氨基酸的分离效果,所以楼主的pH计需要计量校验合格、每次配制流动相时需要用标准缓冲液校正pH计,配制的流动相需要用含有17中氨基酸的标准品溶液衍生化,测试一下分离效果确保同商品化销售的流动相A的效果一致,如果分离度不佳,适当调节pH值。

出现这种情况的原因是楼主调的pH=5.02严格上讲并不完全等于Waters公司销售的流动相A的pH=5.02,这个分离对流动相的pH控制是十分苛刻的,祝你好运!
2楼2013-02-19 13:59:56
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flv1966

铁杆木虫 (正式写手)

头疼

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上这解释太专业了把,受益匪浅
中国有风险,投胎需谨慎!~~~~~~
3楼2013-02-19 14:46:30
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456895

禁虫 (正式写手)

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4楼2013-02-26 11:45:54
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ruiyi1101

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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456895: 金币+20, ★★★很有帮助, 应该是UPLC吧,HPLC的AccQ.Tag使用手册上应该是60%乙腈 2013-02-28 17:19:44
waters在用于HPLC的AccQ.Tag使用手册上描述稀释液B是100%纯乙腈。
5楼2013-02-27 09:29:16
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凌筱禾·无心

银虫 (正式写手)

楼主能给说说,你测氨基酸具体用的色谱条件吗?
不要再打酱油啦,加油加油加油!
6楼2014-01-19 09:38:05
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