| 查看: 7784 | 回复: 32 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
moshangchenx金虫 (正式写手)
|
[求助]
目的片段一端是粘性末端,一端是平末端与相应载体的连接如何提高效率?急! 已有12人参与
|
|
|
我最近在做一个片段与载体的连接构建一个质粒,连了很多次都没连上. 具体如下:我的目的片段一端是粘性末端(Spe I 酶切位点),一端是平末端(SMA I 酶切位点).片段是PCR后连在T载体上测序正确,双酶切效果可以切出两条相应大小的片段.载体是pDBLeu,内含Spe I 与SMA I 酶切位点.其双酶切出的片段与未酶切的片段有电泳大小的区别.目的片段与载体我都双酶切后进行胶回收用去离子水溶解.回收产物电泳可看到模糊条带. 我做了十几次片段与载体不同浓度的连接,Takara Solutiuon I 、TIANGEN的T4DNA连接酶进行16度过夜连接以及用PCR仪进行过夜变温连接,用未酶切的pDBLeu质粒做阳性对照.结果,阳性对照的平板上每次都产生很多菌落,但做连接的板上一个菌落都没有.载体双酶切后片段长9800多bp，目标片段为1800多bp。 做了很多次了都如此,都快做的没信心做下去了,有哪个大哥大姐给我一些建设性意见吗?多谢了!!! |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有201人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Taq 酶扩增的片段能连接平末端载体吗
已经有3人回复
- 一端为黏性末端一端为平末端的连接方法
已经有5人回复
- 粘性末端老是连接不上
已经有9人回复
- 粘性末端连接时长问题
已经有27人回复
- 平端酶与粘性末端酶一起使用，产物能否与目标片段一起链接呢？
已经有12人回复
- 合成的引物直接退火形成粘性末端后连入载体
已经有13人回复
- BamHI,SmaI平末端粘性末端连接问题
已经有11人回复
- 平末端加A尾连接T载体的问题
已经有14人回复
- 一个平末端和粘性末端怎样连接比较好
已经有8人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- DNA片段经过酶切后的粘性末端怎么磨平？
已经有15人回复
- 【求助/交流】酶切后的粘性末端补平
已经有4人回复
- 【求助/交流】粘性末端连接问题
已经有12人回复
moshangchenx
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1913.7
- 散金: 7
- 红花: 1
- 帖子: 345
- 在线: 69.2小时
- 虫号: 1573517
- 注册: 2012-01-11
- 专业: 认知科学
5楼2015-01-12 10:05:28
moshangchenx
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1913.7
- 散金: 7
- 红花: 1
- 帖子: 345
- 在线: 69.2小时
- 虫号: 1573517
- 注册: 2012-01-11
- 专业: 认知科学
2楼2015-01-12 09:08:50
moshangchenx
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1913.7
- 散金: 7
- 红花: 1
- 帖子: 345
- 在线: 69.2小时
- 虫号: 1573517
- 注册: 2012-01-11
- 专业: 认知科学
3楼2015-01-12 09:18:38
4楼2015-01-12 10:00:14
40