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董董董小姐

铁虫 (初入文坛)

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[交流] 求助！！！PCR灵敏性实验~！！

本人是做PCR的新手，现在正在做灵敏性实验，模板梯度稀释老是稀释不好，跑出的条带要么明暗度不好，要么高浓度没有条带低浓度铀条带。。。纠结的不行。。。特来请教各位虫友，有没有高手指点下，模板稀释过程中要注意一那些细节哇~！！！！！

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1楼 2015-01-04 11:06:00

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红卫大兵

木虫 (正式写手)

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模板稀释你用母液稀释10背然后在用稀释10x的在稀释10x也就是说用1-10x-100x-1000x

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6楼2015-01-04 13:13:16

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linzshit

银虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:49:18

楼主的模板是什么啊，如果是质粒的话，你的梯度稀释时还可以看到一个比较好的亮度梯度的，如果是gDNA的话，很多时候是稀释度越高，PCR的效率越高，导致跑调带的时候也越亮，当然这个趋势不是无限制的，但在一定浓度内是这个样子。建议楼主如果只是验证PCR体系灵敏度，与模板类型无关的话，还是换成质粒，效果好点。不过我是不太明白，现在灵敏度还是跑胶后用软件ImageJ测光度吗，那个人为影响太大了，如果有荧光PCR的话就准确多了，当然这只是我想的啊，希望能够帮到你

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7楼2015-01-05 10:04:35

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