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奋斗小青年mm

新虫 (小有名气)

[求助] 苹果中多酚氧化酶的测定问题已有1人参与

测定干燥后苹果中多酚氧化酶活性,但是测得的OD变化值比为处理的苹果还高,也就表明酶活性比原来还高啦,这不符合逻辑啊。。
实验步骤:
酶的提取:
2g苹果+5mlPBS(pH6.4)+3%PVP,10000 g,4 摄氏度离心20min,取上清。
酶的测定:
0.2ml酶液+4mlPBS(pH6.4)+2ml邻苯二酚(0.065mol/L),400nm
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小沐饮吧

铁虫 (初入文坛)

你好,测多酚氧化酶活力的时候,酶液和邻苯二酚反应,
是要混合后充分摇匀在测光值得吗?
是不是吸光值会慢慢增加,怎么有些时候我做的会降低。。。
2楼2016-05-30 09:31:43
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奋斗小青年mm

新虫 (小有名气)

摇匀后再测定,两者反应吸光值增大,用吸光值变化量除以时间来表示酶活性

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3楼2016-05-30 09:50:02
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苏苏_22

新虫 (初入文坛)

你好,我想问下怎么设空白管呢?

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4楼2016-06-07 13:50:42
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苏苏_22

新虫 (初入文坛)

我之前设的空白是PBS和邻苯二酚的混合溶液,但是邻苯二酚自氧化,觉得好像也不能用来调零,所以不知道怎么设空白了,我是测某种抑制剂对酶的抑制作用!

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5楼2016-06-07 13:52:43
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小沐饮吧

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 奋斗小青年mm at 2016-05-30 09:50:02
摇匀后再测定,两者反应吸光值增大,用吸光值变化量除以时间来表示酶活性

我一摇晃就怎么个比色皿中全变成乳白色的是什么回事,这样合理吗?
935381602 如果方便的加练习方式,想请教!!!谢谢
6楼2016-06-12 10:14:10
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小沐饮吧

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 苏苏_22 at 2016-06-07 13:52:43
我之前设的空白是PBS和邻苯二酚的混合溶液,但是邻苯二酚自氧化,觉得好像也不能用来调零,所以不知道怎么设空白了,我是测某种抑制剂对酶的抑制作用!

应该不需要设置空白吧,就是画出,吸光值随时间变化曲线,去直线部分斜率作为酶活力。
取10ml鲜榨果浆与20ml4%(w/v)PVPP充分混合后在12000r/min离心20min后取上清液,即为PPO粗酶液。取1ml粗酶液于比色皿,加入1ml磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液再加入2ml0.2mol/L邻苯二酚溶液(用pH为6.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制)。(我把酶液稀释2.5、5、10倍都试过)。在波长为420nm处连续3min测定吸光值,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标,作出酶活力计算曲线。以吸光值每分钟增加0.001定义为一个酶活力单元,酶活力(R)根据以下公式计算:
R=∆B/∆T÷0.001
式中B——酶活力计算曲线纵坐标, 单位1;
T——酶活力计算曲线横坐标,单位min;
∆B/∆T——酶活力计算曲线中直线部分斜率
7楼2016-06-12 10:16:19
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小天带

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小沐饮吧 at 2016-06-12 10:16:19
应该不需要设置空白吧,就是画出,吸光值随时间变化曲线,去直线部分斜率作为酶活力。
取10ml鲜榨果浆与20ml4%(w/v)PVPP充分混合后在12000r/min离心20min后取上清液,即为PPO粗酶液。取1ml粗酶液于比色皿,加入1m ...

多酚氧化酶活性测定的分光光度计是410nm还还是525nm??不同文献都感觉不一样

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8楼2018-03-15 09:26:06
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大白菜Lee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小沐饮吧 at 2016-06-12 10:14:10
我一摇晃就怎么个比色皿中全变成乳白色的是什么回事,这样合理吗?
935381602 如果方便的加练习方式,想请教!!!谢谢...

想问一下  浑浊的问题解决了吗  怎么解决的

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9楼2018-09-22 09:34:09
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