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[交流]
高效液相中加离子对的问题
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看到一个帖子说：用庚烷磺酸钠甲醇混合液做流动相，进行方法开发，在使用6天后，发现这根柱子的柱效明显降低，拖尾严重，出峰时间和以前明显不同。用C18反相色谱柱做的 离子对的作用：使用液相色谱法分析电离能力比较强的样品时，样品在反相色谱柱上的保留时间很短或者根本不保留，这时要加入相应的离子对试剂，将分析物上的离子进行结合，形成在柱子上有保留的分子。就像是一个物质要穿色谱柱而过时，我们使用离子对试剂将它留住。 这些都是极性导致的，为什么我们不可以把反向色谱柱改为正相色谱柱呢？？这样就可以避免使用对柱子损伤很大的离子对了 |
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一、根据我的工作经验，有这几种原因： 1. 因为C18是最常用的，凡是做分析的实验室必备，但是正相柱就不是了，整个实验室都是C18的情况很常见。 2. 有一种误解：正相柱比反相的贵。其实不然。除了手性柱之外，常见的HILIC柱和反相柱价钱一般多。但是基于这种误解不少人都根本不考虑正相。 3. 另一种误解：除了反相就是正相。其实不然，正反只是相对而言，并无明显的界限。虽然课本上有明确的定义但在实际操作中这个定义并没有什么意义，一切还得以得到最佳色谱结果为原则。比如：amide柱，键合相是酰胺，常用来分离糖，假如我用40%的甲醇走等度，是固定相的极性大还是流动相的极性大？假如走梯度，从30%的甲醇走到70%的甲醇，固定相流动相谁的极性大呢？所以反相正相只有一点参考意义，无法明确区分。 二、为什么要用离子对试剂？ 影响色谱的两个决定性因素：固定相和流动相。在没有其他色谱柱的条件下，也就是无法改变固定相的前提下，只能改变流动相。让反相色谱具备正相选择性的办法就是加离子对试剂。但是这种方法有很大的缺陷，那就是会损伤色谱柱，并且离子对试剂残留在仪器中如果不完全清洗干净还会影响其他实验。 三、最好的办法？ 换柱子。道理很简单，用离子对试剂会损伤柱子，为什么不花钱买合适的色谱柱来避免使用离子对试剂呢？很可惜很多人想不明白这个道理。 |
9楼2014-12-15 14:50:21
lifucheng
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2014-12-15 11:28
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chen934110楼
2014-12-15 15:11
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