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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达组氨酸标记蛋白挂不上镍柱，求高人指点！
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baoyapei

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1楼 2014-12-07 21:15:31
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baoyapei(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-08 16:46:23
baoyapei: 金币+5, ★有帮助, 多谢！ 2014-12-09 08:44:44
你的是N端标签 还是C端标签啊   如果是C端的话是不是没有去掉终止密码子啊   还有做酶切链接的时候  确定没有引起载体移码突变吗
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2楼2014-12-08 11:13:59
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baoyapei

禁虫 (小有名气)
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3楼2014-12-08 14:29:49
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嘿小杨同志

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baoyapei: 金币+5, ★★★很有帮助, 多谢，以后多交流！ 2014-12-10 12:05:31
挂不了柱有以下原因：1镍柱失效，有些镍柱长时间用需要重新挂镍，建议美女楼主换一个或者重新挂镍。2重悬蛋白缓冲液中最好不要有EDTA，还有你的蛋白是包涵体，最好纯化的过程中全用含有8M尿素的溶液梯度洗脱。3降低重悬液中咪唑的浓度。楼主加油！做蛋白是个锻炼体力的过程~
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4楼2014-12-09 17:11:23
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baoyapei

禁虫 (小有名气)
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5楼2014-12-10 12:05:00
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