24小时热门版块排行榜    

查看: 474  |  回复: 2
本帖产生 1 个 博学EPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

miao2010

木虫 (正式写手)

[求助] 细菌的分子鉴定

各位虫友:
           大家好,本人在做细菌的分子鉴定时,出现了些故障。每次细菌DNA提取完后,进行PCR,再送出去测序,要测的片段是750bp左右,但测序结果始终从500bp以后都有双峰,我也改变了退火温度,但效果不明显。能确保是单一菌落提DNA,除了连梯载,还有什么办法吗?请各位指点指点,在此谢过了。
            PCR引物:1405f(5'-TGYACACACCGCCCGT-3')
                            456r(5'-CCTTT CCCTCACGGTACTG -3')
              程序:94度,5min
                         94度,1min
                         61度,1min
                         72度,90s
                         72度,10min

细菌的分子鉴定
bw988h2502922_1409724304_617.jpg


细菌的分子鉴定-1
bw988h2502922_1409724304_617.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

厚积薄发,天道酬勤
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

miao2010

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guoliwang at 2014-12-06 18:45:47
你PCR引物命名为什么大序号用f(forward),小序号用r(reverse)呢?
测序只用了正向引物么?可以用反向引物测序,应该500bp后面的信号会比较清楚。
如果想用单引物测通,可以提高PCR产物的浓度。比如增加PCR反应体积 ...

好的,谢谢。我做的双向测序,正反向都测,体积已经25微升了
厚积薄发,天道酬勤
3楼2014-12-09 11:58:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
miao2010: 金币+45, 博学EPI+1 2014-12-09 11:55:20
你PCR引物命名为什么大序号用f(forward),小序号用r(reverse)呢?
测序只用了正向引物么?可以用反向引物测序,应该500bp后面的信号会比较清楚。
如果想用单引物测通,可以提高PCR产物的浓度。比如增加PCR反应体积或者增加一管PCR反应,产物浓缩后的体积不变。
慎思明辨博学笃行
2楼2014-12-06 18:45:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 08工学调剂 +12 用户573181 2026-03-20 17/850 2026-03-24 21:45 by 番茄炖了西红柿
[考研] 求调剂 +6 研研,接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 081700 调剂 267分 +9 迷人的哈哈 2026-03-23 9/450 2026-03-24 11:58 by 544594351
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-22 5/250 2026-03-23 22:01 by fuyu_
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见