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mervyntin

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA模板的PCR，结束后管里有白色絮状沉淀 已有4人参与

我做的植物果实RNA反转录获得的cDNA，现在筛选引物，同样引物有时有带，有时没有，后续效果都不好。
现发现一个问题，在PCR之前确定体系里没有沉淀，P完之后每管里都有，白色的絮状物，请教这是什么东西？
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1楼 2014-12-03 10:51:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-03 21:10:26
我觉得是你提取RNA纯度不够，混入了蛋白质，受热之后变性沉淀。
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科研炮灰
2楼2014-12-03 10:54:06
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-03 21:10:35
无中生有？我猜是DNA。你试试能不能溶解它？
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3楼2014-12-03 10:55:49
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-03 21:10:43
白色絮状一般是DNA，PCR的循环过多了吧，或者改改退火温度。
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永远相信未知的总是美好的！
6楼2014-12-03 17:35:03
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elise1987

金虫 (著名写手)
原因不清楚，但是可以告诉你正常情况下是不可能有絮状物的，因为并不是大分子的片段浓度太高导致饱和。本人做过很多RT-PCR，从未出现过这样的状况。或者楼主试试看稀释一下模板。
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不折腾，不胡闹，珍惜时间和生命
8楼2014-12-04 13:23:02
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hxxzhz

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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pcr所用的buffer是会有沉淀的，确定你的buffer混合均匀了嘛
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努力做一件事情。。。
9楼2014-12-04 16:33:31
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普通回帖

mervyntin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cckk_2000 at 2014-12-03 10:54:06
我觉得是你提取RNA纯度不够，混入了蛋白质，受热之后变性沉淀。

反转录时未发现沉淀，是跑普通PCR是看见的，RNA的260/280是1.9左右，但是260/230的确低，在0.6左右
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4楼2014-12-03 16:22:44
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mervyntin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-03 10:55:49
无中生有？我猜是DNA。你试试能不能溶解它？

P之前没有，P完肉眼看着就有几块
可以试试看能不能溶，现在这有杂质的跑电泳没条带，只有二聚体
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5楼2014-12-03 16:24:28
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mervyntin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zshw_001 at 2014-12-03 17:35:03
白色絮状一般是DNA，PCR的循环过多了吧，或者改改退火温度。

有这絮状物，电泳没条带
用枪头吹打几次，都不溶解
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7楼2014-12-04 12:37:18
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mervyntin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by elise1987 at 2014-12-04 13:23:02
原因不清楚，但是可以告诉你正常情况下是不可能有絮状物的，因为并不是大分子的片段浓度太高导致饱和。本人做过很多RT-PCR，从未出现过这样的状况。或者楼主试试看稀释一下模板。

感觉还是试剂有问题，我换了试剂盒，就没有沉淀了
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10楼2014-12-04 20:59:33
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