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subtiger

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质分离纯化问题 已有6人参与

粗肽液用层析柱纯化,流动相是PBS,层析柱是G25,分离之后得到的组分冷冻干燥。最后所得的样品粉末中,大部分都是盐~~~测定肽浓度含量也很低,测定活性的时候,由于盐浓度过高,加乙醇析出,也会影响实验结果~~~~~
      试验该如何进行下去,求解~~~~~
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Leto_novo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可用50 mM的碳酸氢铵缓冲液或者G25纯化后走一遍HPLC反相纯化后再冻干
6楼2014-12-30 20:57:25
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查看全部 7 个回答

jjf139

金虫 (著名写手)

新药研发&药物分析

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与,应助指数 +1
过脱盐柱或透析,含盐高后续很多检测都会有影响

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-12-01 18:05:02
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amesy0129

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以考虑超滤,但是蛋白可能有损耗,量大的话可以试试。
常用的方法就是透析。
3楼2014-12-02 09:34:22
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siashq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

将G25流动相PBS改成挥发性缓冲成分,并不含氯化钠,冻干后就无盐了。此法最省事,无需额外透析或超滤步骤。
4楼2014-12-05 09:23:42
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