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懒一番

新虫 (初入文坛)

[求助] 求大神指点,ERIC-PCR基本没有条带,出现引物二聚体 已有2人参与

求大神指点,ERIC-PCR基本没有条带,出现引物二聚体
兔粪做多态性,ERIC-PCR多次没效果,反应条件是:95℃ 5min,30个循环( 94℃ 1min,  52℃ 1min ,65℃ 8min )65℃ 16min
25微升体系:模板4.5μL,引物各0.5μL(100μmol/L),10*扩增缓冲液(含Mg离子)2.5μL,dNTP(10mmol/L),Taq酶0.5μL,双蒸水16μL。
0.1%的琼脂糖凝胶,90V 30min,得到的电泳图 http://\"求大神指点,ERIC-PCR基本没有条带,出现引物二聚体\"

求大神指点,ERIC-PCR基本没有条带,出现引物二聚体-1
IMG_20141121_164934_1417083687521.jpg
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赵慧铮

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你是用粪便培养出来之后进行鉴定没?ERIC-PCR好像阴性菌做的比较多,尤其是肠杆菌科细菌,不知你做的是什么
2楼2014-12-16 21:02:26
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懒一番

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 赵慧铮 at 2014-12-16 21:02:26
你是用粪便培养出来之后进行鉴定没?ERIC-PCR好像阴性菌做的比较多,尤其是肠杆菌科细菌,不知你做的是什么

我是直接从兔粪中提所有细菌的DNA当模版做的,但效果一直不好,是不是模版的问题啊?
3楼2014-12-27 15:17:55
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴

你用的marker是多大的?
路漫漫兮,吾必上下而求索!
4楼2014-12-27 17:19:07
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴

【答案】应助回帖

有设置对照么?那个泳道是啊
路漫漫兮,吾必上下而求索!
5楼2014-12-27 17:25:21
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solomon7811

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应当是模板的问题,如果是粗提的DNA你按照2X,5X,10X对模板做稀释,然后再进行PCR。
PS:
25ul加4.5ul模板,是不是多了点,占体系总体积的1/5,万一存在抑制物,很可能P不出来东西!
引物浓度貌似也很高啊!
6楼2014-12-30 19:05:19
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