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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求大神指点，ERIC-PCR基本没有条带，出现引物二聚体
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懒一番

新虫 (初入文坛)

[求助] 求大神指点，ERIC-PCR基本没有条带，出现引物二聚体 已有2人参与

求大神指点，ERIC-PCR基本没有条带，出现引物二聚体
兔粪做多态性，ERIC-PCR多次没效果，反应条件是：95℃ 5min，30个循环（ 94℃ 1min，  52℃ 1min ，65℃ 8min ）65℃ 16min
25微升体系：模板4.5μL，引物各0.5μL（100μmol/L），10*扩增缓冲液（含Mg离子）2.5μL，dNTP（10mmol/L），Taq酶0.5μL，双蒸水16μL。
0.1%的琼脂糖凝胶，90V 30min，得到的电泳图 http://\"求大神指点，ERIC-PCR基本没有条带，出现引物二聚体\"

求大神指点，ERIC-PCR基本没有条带，出现引物二聚体-1
IMG_20141121_164934_1417083687521.jpg
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1楼 2014-11-27 20:07:46
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赵慧铮

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你是用粪便培养出来之后进行鉴定没？ERIC-PCR好像阴性菌做的比较多，尤其是肠杆菌科细菌，不知你做的是什么
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2楼2014-12-16 21:02:26
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懒一番

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 赵慧铮 at 2014-12-16 21:02:26
你是用粪便培养出来之后进行鉴定没？ERIC-PCR好像阴性菌做的比较多，尤其是肠杆菌科细菌，不知你做的是什么

我是直接从兔粪中提所有细菌的DNA当模版做的，但效果一直不好，是不是模版的问题啊？
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3楼2014-12-27 15:17:55
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴
你用的marker是多大的？
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路漫漫兮，吾必上下而求索！
4楼2014-12-27 17:19:07
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴

【答案】应助回帖

有设置对照么？那个泳道是啊
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路漫漫兮，吾必上下而求索！
5楼2014-12-27 17:25:21
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solomon7811

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应当是模板的问题，如果是粗提的DNA你按照2X，5X，10X对模板做稀释，然后再进行PCR。
PS：
25ul加4.5ul模板，是不是多了点，占体系总体积的1/5，万一存在抑制物，很可能P不出来东西！
引物浓度貌似也很高啊！
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6楼2014-12-30 19:05:19
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