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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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峰行天下

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白过离子交换树脂应该选择什么缓冲液? 已有2人参与

一种蛋白无组氨酸标签,想过离子交换树脂,以前没做过,有做过的大侠给个建议:PI=4.71,分子量23kD,我有GE的HiTrap的七种预装组,我选择DEAE FF,缓冲液选bis-Tris或三乙醇胺(0.02M),不知道这样选择行不行?
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-11-19 11:27:51
选择什么缓冲液与蛋白质的稳定性相关,如果在8.0下不稳定就会全灭了,我遇到过,所以PI不是唯一的考虑因素。如果在8.0下稳定,我首选Q,缓冲液用tris-hcl。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2014-11-18 03:41:44
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-11-19 11:27:39
DEAE-阴离子交换填料,pI4.7,可以用Bis-Tris试试,缓冲区间6-7,需要摸下条件了
Tobeornottobe,that'saproblem
2楼2014-11-17 08:53:13
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峰行天下

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-11-18 03:41:44
选择什么缓冲液与蛋白质的稳定性相关,如果在8.0下不稳定就会全灭了,我遇到过,所以PI不是唯一的考虑因素。如果在8.0下稳定,我首选Q,缓冲液用tris-hcl。

为什么选8.0呢?偏碱性了,中性的bis-tris不是更好么?而且距离PI近得到的蛋白应该更纯不是吗?请教了!
4楼2014-11-19 09:44:23
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
4楼: Originally posted by 峰行天下 at 2014-11-19 09:44:23
为什么选8.0呢?偏碱性了,中性的bis-tris不是更好么?而且距离PI近得到的蛋白应该更纯不是吗?请教了!...

距离PI近,蛋白质所带电荷弱,会导致吸附不紧密,一不小心就流穿了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-11-19 18:59:09
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