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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白过离子交换树脂应该选择什么缓冲液？
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峰行天下

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白过离子交换树脂应该选择什么缓冲液？ 已有2人参与

一种蛋白无组氨酸标签，想过离子交换树脂，以前没做过，有做过的大侠给个建议：PI=4.71，分子量23kD，我有GE的HiTrap的七种预装组，我选择DEAE FF，缓冲液选bis-Tris或三乙醇胺（0.02M），不知道这样选择行不行？
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1楼 2014-11-14 15:43:04
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-11-19 11:27:39
DEAE-阴离子交换填料，pI4.7，可以用Bis-Tris试试，缓冲区间6-7，需要摸下条件了
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Tobeornottobe,that'saproblem
2楼2014-11-17 08:53:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-11-19 11:27:51
选择什么缓冲液与蛋白质的稳定性相关，如果在8.0下不稳定就会全灭了，我遇到过，所以PI不是唯一的考虑因素。如果在8.0下稳定，我首选Q，缓冲液用tris-hcl。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2014-11-18 03:41:44
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峰行天下

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-11-18 03:41:44
选择什么缓冲液与蛋白质的稳定性相关，如果在8.0下不稳定就会全灭了，我遇到过，所以PI不是唯一的考虑因素。如果在8.0下稳定，我首选Q，缓冲液用tris-hcl。

为什么选8.0呢？偏碱性了，中性的bis-tris不是更好么？而且距离PI近得到的蛋白应该更纯不是吗？请教了！
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4楼2014-11-19 09:44:23
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
4楼: Originally posted by 峰行天下 at 2014-11-19 09:44:23
为什么选8.0呢？偏碱性了，中性的bis-tris不是更好么？而且距离PI近得到的蛋白应该更纯不是吗？请教了！...

距离PI近，蛋白质所带电荷弱，会导致吸附不紧密，一不小心就流穿了。
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5楼2014-11-19 18:59:09
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峰行天下

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-11-19 18:59:09
距离PI近，蛋白质所带电荷弱，会导致吸附不紧密，一不小心就流穿了。...

可以选择强阴离子交换柱吗？强和阴的区别是什么？如果用阴离子交换柱洗脱下来三个峰，用强离子交换柱这三个峰会有什么变化？
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6楼2014-11-21 16:42:47
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
6楼: Originally posted by 峰行天下 at 2014-11-21 16:42:47
可以选择强阴离子交换柱吗？强和阴的区别是什么？如果用阴离子交换柱洗脱下来三个峰，用强离子交换柱这三个峰会有什么变化？...

我上面建议你用的Q就是强阴。其它问题我之前说过，但是这个论坛不保留之前的数据，我也就不想再说了。你用一次之后自己也会有体会的。
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7楼2014-11-21 22:48:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
我的两百多个EPI，居然也保留不了记录，老实说，我很失望。证据已经没有了，我现在只算是个新人。
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8楼2014-11-21 22:51:49
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峰行天下

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-11-21 22:48:52
我上面建议你用的Q就是强阴。其它问题我之前说过，但是这个论坛不保留之前的数据，我也就不想再说了。你用一次之后自己也会有体会的。...

谢谢前辈，还有很多像你学习的地方！
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9楼2014-11-22 08:27:41
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