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峰行天下

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白过离子交换树脂应该选择什么缓冲液? 已有2人参与

一种蛋白无组氨酸标签,想过离子交换树脂,以前没做过,有做过的大侠给个建议:PI=4.71,分子量23kD,我有GE的HiTrap的七种预装组,我选择DEAE FF,缓冲液选bis-Tris或三乙醇胺(0.02M),不知道这样选择行不行?
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-11-19 11:27:51
选择什么缓冲液与蛋白质的稳定性相关,如果在8.0下不稳定就会全灭了,我遇到过,所以PI不是唯一的考虑因素。如果在8.0下稳定,我首选Q,缓冲液用tris-hcl。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2014-11-18 03:41:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
4楼: Originally posted by 峰行天下 at 2014-11-19 09:44:23
为什么选8.0呢?偏碱性了,中性的bis-tris不是更好么?而且距离PI近得到的蛋白应该更纯不是吗?请教了!...

距离PI近,蛋白质所带电荷弱,会导致吸附不紧密,一不小心就流穿了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-11-19 18:59:09
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
6楼: Originally posted by 峰行天下 at 2014-11-21 16:42:47
可以选择强阴离子交换柱吗?强和阴的区别是什么?如果用阴离子交换柱洗脱下来三个峰,用强离子交换柱这三个峰会有什么变化?...

我上面建议你用的Q就是强阴。其它问题我之前说过,但是这个论坛不保留之前的数据,我也就不想再说了。你用一次之后自己也会有体会的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2014-11-21 22:48:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

我的两百多个EPI,居然也保留不了记录,老实说,我很失望。证据已经没有了,我现在只算是个新人。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2014-11-21 22:51:49
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