应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » DGGE切胶回收后测序，结果全是双峰？！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 2021  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shully

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE切胶回收后测序，结果全是双峰？！ 已有3人参与

送出去测序，73个样品，只有4个是已通，其余的全是双峰。请问这是怎么回事呢？
切胶后回收的PCR程序没有用之前的那个，是一个简单得多的，是因为这个原因吗？
还是我切胶的技术太差，全割成几个条带一块儿的了？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-14 14:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微基生物

捐助贵宾 (小有名气)

技术专员
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 应助指数-1, 非应助 2014-11-22 12:13:54
你是TA克隆后做的测序吗？
赞一下(1人) 回复此楼
专注微生物多样性分析QQ2758452825
2楼2014-11-14 15:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shully

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 微基生物 at 2014-11-14 15:03:19
你是TA克隆后做的测序吗？

不是，我们这边没条件，是PCR后送到外边去测序，好像说如果结果不好再TA克隆吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-11-14 16:10:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myrazhang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看你的样品是不是微生物量很丰富，如果微生物量较大，相似微生物群落较多的话，可能是你的DGGE并没彻底分开不同菌株，所以建议优化变性剂的梯度~或者切胶回收的DNA样品，再用相同带GC夹子的引物PCR，扩增产物再做DGGE，这样既能检测是否单条带，又能再次分离杂条带。
但是，据 Yang 和 Crowley （ 2004 ）的研究发现有时同一 DGGE 条带可能含有两种或两种以上的微生物。所以~DGGE能反映多样性和丰富度，但是作为菌群检测，还是应该选择更先进的方法了哈~
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-17 17:04:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shully

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by myrazhang at 2014-11-17 17:04:28
看你的样品是不是微生物量很丰富，如果微生物量较大，相似微生物群落较多的话，可能是你的DGGE并没彻底分开不同菌株，所以建议优化变性剂的梯度~或者切胶回收的DNA样品，再用相同带GC夹子的引物PCR，扩增产物再做DG ...

我有这样做过，用第一次DGGE梯度，将切割回收的样品用带GC夹子引物PCR后再次用相同梯度浓度DGGE，但结果的条带都不在原来的位置了，而且都有很多条
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-20 10:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boyoushun

新虫 (初入文坛)
是不是直接测序啊
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-22 09:30:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议还是坐下克隆，很简单的
赞一下 回复此楼
新手入门求各位大神指导
7楼2014-11-25 15:49:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ichristina

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by shully at 2014-11-20 10:14:50
我有这样做过，用第一次DGGE梯度，将切割回收的样品用带GC夹子引物PCR后再次用相同梯度浓度DGGE，但结果的条带都不在原来的位置了，而且都有很多条...

我也出现相同的情况，请问楼主，你的问题解决了吗？
赞一下 回复此楼
8楼2015-01-10 18:51:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shully 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +18 RichLi_ 2026-03-25 18/900 2026-03-29 14:55 by 唐沐儿
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 322求调剂 +7 宋明欣 2026-03-27 7/350 2026-03-28 21:27 by sanrepian
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 085600，材料与化工321分求调剂 +9 大馋小子 2026-03-28 9/450 2026-03-28 14:56 by 神马都不懂
[考研] 322求调剂 +5 旧吢 2026-03-24 5/250 2026-03-28 13:26 by Iveryant
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考博] 26申博 +3 加油冲啊！ 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学338求调剂！ +6 Zuhui0306 2026-03-26 7/350 2026-03-27 10:35 by shangxh
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭