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flll2014

铜虫 (小有名气)

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专业: 动物遗传学

[交流] 如何分开his融合蛋白和去标签蛋白质已有2人参与

我的蛋白质加了sumo标签，融合蛋白纯化的浓度还挺高的，然后去标签再过镍柱，理想状态是目的蛋白流穿，sumo标签和未被完全切开的融合蛋白结合在镍柱上，刚开始做的时候用磷酸缓冲液平衡镍柱，结果蛋白全结合在镍柱上了，后来用20mM咪唑平衡镍柱，目的蛋白和标签是分开了，可是未被完全切割的融合蛋白竟然和目的蛋白一起流出来了，请问下这融合蛋白带了his标签怎么第二次过镍柱就不结合了呢，如何将融合蛋白与目的蛋白分开呢。

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1楼 2014-10-15 20:42:34

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joblee

木虫 (正式写手)

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专业: 中药抗肿瘤药理

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

是不是咪唑浓度太好了，可以在0~20之间设梯度重新试试。这次实验洗下来的蛋白不要直接过柱，里面已经有咪唑了，可以透析后再用，或者干脆重新表达或提取。

[ 发自小木虫客户端 ]

2楼2014-10-15 21:55:46

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635450245

银虫 (正式写手)

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注册: 2012-10-21
性别: MM
专业: 合成药物化学

过FPLC可以吗

幸福就好！！！

3楼2014-11-27 13:15:04

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