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[交流]
如何分开his融合蛋白和去标签蛋白质 已有2人参与
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我的蛋白质加了sumo标签，融合蛋白纯化的浓度还挺高的，然后去标签再过镍柱，理想状态是目的蛋白流穿，sumo标签和未被完全切开的融合蛋白结合在镍柱上，刚开始做的时候用磷酸缓冲液平衡镍柱，结果蛋白全结合在镍柱上了，后来用20mM咪唑平衡镍柱，目的蛋白和标签是分开了，可是未被完全切割的融合蛋白竟然和目的蛋白一起流出来了，请问下这融合蛋白带了his标签怎么第二次过镍柱就不结合了呢，如何将融合蛋白与目的蛋白分开呢。 |
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