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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蓝白筛选中全部蓝斑是什么原因？
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Mimo1993

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白筛选中全部蓝斑是什么原因？ 已有2人参与

我们设置了两组：实验组是plasmid+DNA fragments，对照组是只有plasmid，然后蓝白筛选，结果实验组全是蓝斑，对照组上面只有两三个蓝斑，其他的什么也没有，这是怎么回事啊？
1.对照组蓝色斑不多说明plasmid量不够，但是实验组上面是长的密密麻麻的呢。
2.而且，实验组上全是蓝斑，是不是就只能说明DNA fragments没插进去或者说DNA fragment的量不足。
3. 是人为原因的可能性比较小，因为另外一个小组跟我们的结果一样，不可能这么巧合。
PS:我们跟那个小组的共同点就是：因为开始实验步骤做错了，重新做。重新做的时候试剂什么的不够，去其他小组借的试剂，这中间会有
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1楼 2014-10-15 19:52:51
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joblee

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-16 11:24:05
还有一种可能，里面有假阴性。记得有个载体说明书上讲会有很小的几率发生这种情况。

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2楼2014-10-15 22:00:50
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joblee

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by joblee at 2014-10-15 22:00:50
还有一种可能，里面有假阴性。记得有个载体说明书上讲会有很小的几率发生这种情况。

可以试试挑十来个蓝斑PCR鉴定一下

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-10-15 22:01:44
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-16 11:24:12
TA 克隆还是 酶切插入？如果是TA克隆或单酶切，连接产物有很多的蓝色克隆就可能是载体自连产生的，可以用去磷酸酶处理一下；如果是双酶切，那就可能是酶切不充分造成的。听楼主的叙述，好像在做实验课，而不是自己的实验？如果是实验课，还有一个可能就是在插入片段上面了，是其他载体片段还是PCR得来的？

楼主如果提供更多的信息，可以供大家更好的分析。比如反应体系，插入片段是什么？
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4楼2014-10-16 06:38:18
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Mimo1993

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-10-16 06:38:18
TA 克隆还是 酶切插入？如果是TA克隆或单酶切，连接产物有很多的蓝色克隆就可能是载体自连产生的，可以用去磷酸酶处理一下；如果是双酶切，那就可能是酶切不充分造成的。听楼主的叙述，好像在做实验课，而不是自己的 ...

确实是实验课。。。酶切插入，我们先用Sau3I 切 lamda DNA， 用Bam HI 切pUC 18，然后ligation， transformation，然后overnight incubation，最后得到的结果就是这样了，我们为了防止载体自连已经用CIP 处理过了。如果载体自连的话，没有插入片段的那个应该有很多蓝色菌落啊，但是只有三个，感觉怎么解释都解释不通
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5楼2014-10-16 10:58:08
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sun_in_night

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Mimo1993 at 2014-10-15 14:58:08
确实是实验课。。。酶切插入，我们先用Sau3I 切 lamda DNA， 用Bam HI 切pUC 18，然后ligation， transformation，然后overnight incubation，最后得到的结果就是这样了，我们为了防止载体自连已经用CIP 处理过了。 ...

为什么切完之后没有纯化，直接ligate了？还有只有你们两组有这个情况还是所有做实验的都有一样的结果？
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6楼2014-10-16 21:27:54
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