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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达提蛋白细菌裂解液为什么要冰上消化？
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cnzpli

金虫 (正式写手)

[求助] 原核表达提蛋白细菌裂解液为什么要冰上消化？ 已有2人参与

如题，在做原核表达。裂解细菌选择了含1mg/ml溶菌酶的裂解液。溶菌酶最适温度应该是37度左右，但是为什么资料上都是冰上裂解，然后超声处理呢？
我试了直接37度裂解之后不超声波处理直接离心制样感觉也还可以啊
求大神指导！
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1楼 2014-10-13 13:10:48
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是个人习惯问题吧，在冰上操作是怕蛋白质降解；但是我个人是同意楼主的做法的！
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路漫漫兮，吾必上下而求索！
2楼2014-10-13 13:56:35
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by cjl25413477 at 2014-10-13 13:56:35
是个人习惯问题吧，在冰上操作是怕蛋白质降解；但是我个人是同意楼主的做法的！

补充下冰上操作是为了大量的获得目的蛋白，如果只是用来蛋白检测按照楼主的做法，没有问题！不过建议需要统一操作，还是在冰上操作，得到的数据更有说服力！
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路漫漫兮，吾必上下而求索！
3楼2014-10-13 14:04:04
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴
引用回帖:
2楼: Originally posted by cjl25413477 at 2014-10-13 13:56:35
是个人习惯问题吧，在冰上操作是怕蛋白质降解；但是我个人是同意楼主的做法的！

补充说明下，如果需要大量的目的蛋白的话，还是要在冰上操作的，如果只是用来检测，楼主的方法可以！
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路漫漫兮，吾必上下而求索！
4楼2014-10-13 14:07:33
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cnzpli: 金币+10, ★★★很有帮助, 很全面很详细 2014-10-13 16:05:50
包涵体变性、复性及纯化
http://blog.sina.com.cn/s/blog_5f4f3e2d0100t8bb.html
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5楼2014-10-13 14:53:03
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cnzpli

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cjl25413477 at 2014-10-13 14:07:33
补充说明下，如果需要大量的目的蛋白的话，还是要在冰上操作的，如果只是用来检测，楼主的方法可以！...

好吧 看来还是得用超声波
突然想到pmsf高于4度容易失活的 哈哈
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6楼2014-10-13 15:57:42
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