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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Trizol同提取DNA做定量PCR
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花

[求助] Trizol同提取DNA做定量PCR 已有2人参与

各位大侠：我想用Trizol同时提取DNA和RNA，请教各位这样提取的DNA可不可以做定量PCR？不胜感激！
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1楼 2014-10-13 11:56:24
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-13 15:56:17
能提出来，降解不多就可以吧。我用TRIzol法中提DNA的方法没提出来、、、、、、楼主不知道用TRIzol说明书里提DNA的方法提没提过啊
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2楼2014-10-13 14:48:30
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-13 15:56:20
拜托！你做的是什么基因的定量啊！不是要提RNA的么？提RNA的时候要较好的消除里面的DNA，因为实验要牵扯到RNA反转录成DNA，为了保证基因拷贝数的准确性，所得到的RNA不仅要完整，还要没有DNA的污染，获得的质量较高的RNA做定量，没有问题的！
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路漫漫兮，吾必上下而求索！
3楼2014-10-13 14:54:50
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cjl25413477

木虫 (正式写手)

欧巴
引用回帖:
3楼: Originally posted by cjl25413477 at 2014-10-13 14:54:50
拜托！你做的是什么基因的定量啊！不是要提RNA的么？提RNA的时候要较好的消除里面的DNA，因为实验要牵扯到RNA反转录成DNA，为了保证基因拷贝数的准确性，所得到的RNA不仅要完整，还要没有DNA的污染，获得的质量较高 ...

应该是基因的表达量的准确性！
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路漫漫兮，吾必上下而求索！
4楼2014-10-13 15:00:31
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cjl25413477 at 2014-10-13 15:00:31
应该是基因的表达量的准确性！...

DNA  也可以荧光定量的啊
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5楼2014-10-13 19:58:42
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-10-13 14:48:30
能提出来，降解不多就可以吧。我用TRIzol法中提DNA的方法没提出来、、、、、、楼主不知道用TRIzol说明书里提DNA的方法提没提过啊

弱碱稀释的DNA，可以用么？
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6楼2014-10-13 20:18:00
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
3楼: Originally posted by cjl25413477 at 2014-10-13 14:54:50
拜托！你做的是什么基因的定量啊！不是要提RNA的么？提RNA的时候要较好的消除里面的DNA，因为实验要牵扯到RNA反转录成DNA，为了保证基因拷贝数的准确性，所得到的RNA不仅要完整，还要没有DNA的污染，获得的质量较高 ...

我想在做一个基因表达量的同时，要做另外一个基因的copy数，所以既需要提取DNA，也需要提取RNA.
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7楼2014-10-13 20:19:35
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-10-13 19:58:42
DNA  也可以荧光定量的啊...

它说明书上说必须用弱碱稀释DNA，弱碱会影响PCR的扩增效率么？
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8楼2014-10-13 20:20:59
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-10-13 14:48:30
能提出来，降解不多就可以吧。我用TRIzol法中提DNA的方法没提出来、、、、、、楼主不知道用TRIzol说明书里提DNA的方法提没提过啊

还没有提取，先学习一下技术！
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9楼2014-10-13 20:24:10
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
qiuzhileipo(西门吹雪170代发): 金币+1, 感谢分享经验 2014-10-14 10:52:25
引用回帖:
6楼: Originally posted by qiuzhileipo at 2014-10-13 20:18:00
弱碱稀释的DNA，可以用么？...

我用普通水溶解的，反正是没有提出来，我看见最好是用弱碱溶解了，但是得用HEPES调节pH才能用于后续的PCR反应。买这个药品还得等一个多月的时间，我就舍弃这种方法了，改用CTAB了
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10楼2014-10-14 09:03:10
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