| 查看: 2442 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
小白求助基因克隆步骤 已有2人参与
|
||
| 如果已知一个物种的某段基因的序列，怎样利用生物信息学方法，克隆到与该物种同源的另一个物种的具有相同功能的基因。具体步骤该怎么做，我blast了一下，就找到一个目的物种与其同源的基因序列，接下来该怎么设计引物呢，用到哪些软件麻烦都告诉我一下，不要求具体操作，但是希望能告知大体流程。如果顺利多长时间可以拿到该基因，功能验证的话应该怎么验证，要花多长时间大概，也希望告知。功能验证能不能利用northern blot验证呢，该基因是与根尖分裂有关的，想着看一下干旱胁迫后该基因的表达情况能行么。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有97人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 活化铁粉的具体操作步骤
已经有3人回复
- 基因方面的问题，门外汉求助。
已经有7人回复
- western小白求助-内参相关
已经有13人回复
- 急求！DNA如何具体纯化？
已经有8人回复
- 求助！新人，融合PCR一直融不上！！！
已经有24人回复
- 质粒DNA快速提取方法与步骤
已经有3人回复
- 大家说说分子生物学实验经常遇到哪些问题
已经有11人回复
- 鐑�?� 棰樼洰涓��?� 灏?鐧芥眰鏁�
已经有3人回复
- 融合PCR详细步骤
已经有8人回复
- 关于TA克隆蓝白斑筛选
已经有12人回复
- 求镍柱子纯化表达蛋白的具体步骤，注意事项！！！
已经有5人回复
- 求助--双酶切连接构质粒
已经有15人回复
- MEGA建树步骤,可以使用基因片段吗？
已经有12人回复
- 酰氯和长链醇（内盐）反应，具体步骤求助，re-precipitating是什么操作。
已经有4人回复
- 求助··测定物质DNA序列的大概步骤
已经有3人回复
- PCR产物电泳以后，怎样测序？具体的步骤
已经有3人回复
- 小白请问，cDNA第一条链合成后如何做PCR了？
已经有5人回复
- 关于westen-blot实验的具体步骤及实验中注意的问题，请教！
已经有5人回复
- 【求助】matlab 中，几个m文件调用
已经有14人回复
- 【求助】帮忙蒙特卡罗原理
已经有4人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
nwsuafliu
木虫 (著名写手)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2406.9
- 散金: 1449
- 红花: 18
- 帖子: 1437
- 在线: 315.6小时
- 虫号: 136928
- 注册: 2005-12-17
- 专业: 作物分子育种
4楼2014-10-13 11:29:11
nwsuafliu
木虫 (著名写手)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2406.9
- 散金: 1449
- 红花: 18
- 帖子: 1437
- 在线: 315.6小时
- 虫号: 136928
- 注册: 2005-12-17
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 09:05:53
疯狂的麦子: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-10-13 11:25:44
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 09:05:53
疯狂的麦子: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-10-13 11:25:44
|
简单的流程如下，你既然已经知道这个基因的序列，那么如下操作便可。 1 设计引物。可以使用软件primer6, oligo6.或者使用Primer3在线设计工具。我个人习惯使用primer3的在线设计 2 PCR扩增 - 胶回收 、纯化 - 连接反应 - 转化大肠杆菌（DH5a) - 提取质粒 - 测序验证序列正确性。 3 表达载体构建。把步骤2得到的基因片段转入植物表达载体，例如pCAMBIA1301. 4 植物遗传转化。农杆菌介导得到转基因苗。 5 查看表型。 如果只是看胁迫条件下的表达，那么直接根据cDNA序列设计引物，采集对照条件和胁迫条件下的根、叶样品，提取RNA，进行RT-PCR即可，可半定量或者定量。 |
2楼2014-10-13 08:48:17
3楼2014-10-13 10:12:12
5楼2014-10-13 11:50:10
