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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xfxycy3090

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[交流] 大家说说分子生物学实验经常遇到哪些问题 已有4人参与

我只想和大家聊聊,没有金币,看看大家都遇到哪些难题?
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飞约疯人院

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科学怪人

做PCR电泳后跑电泳,目的基因是489BP的,结果每次切胶回收后再跑电泳就变成500多了,快到600了?为什么?
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-29 10:46:02
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清雅风

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近总是敲不掉基因(农杆菌转化),都是随机插入了,将农杆菌的质粒提出来转大肠杆菌,竟然大肠杆菌不长了~郁闷中~~试了好多次了

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朝着自己的理想奔跑,就是幸福!
7楼2014-05-30 22:50:58
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xfxycy3090

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-29 10:46:02
做PCR电泳后跑电泳,目的基因是489BP的,结果每次切胶回收后再跑电泳就变成500多了,快到600了?为什么?

切胶前检测没,是多大
3楼2014-05-29 10:54:40
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

引用回帖:
3楼: Originally posted by xfxycy3090 at 2014-05-29 10:54:40
切胶前检测没,是多大...

检测了,小于500的
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
4楼2014-05-29 10:56:57
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xfxycy3090

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引用回帖:
4楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-29 10:56:57
检测了,小于500的...

首先,电泳时间长一点,看PCR扩增是否是一条带;
其次,注意电泳的loading buffer,maker的和PCR的不一样,电泳速率也可能不同;
最后,实在找不出原因,做个TA克隆,测序,看是不是要的序列。
5楼2014-05-29 13:18:24
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飞约疯人院

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科学怪人


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5楼: Originally posted by xfxycy3090 at 2014-05-29 13:18:24
首先,电泳时间长一点,看PCR扩增是否是一条带;
其次,注意电泳的loading buffer,maker的和PCR的不一样,电泳速率也可能不同;
最后,实在找不出原因,做个TA克隆,测序,看是不是要的序列。...

再联系你,谢谢啦嘿嘿
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
6楼2014-05-29 17:51:42
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dongge2013

金虫 (小有名气)


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引用回帖:
7楼: Originally posted by 清雅风 at 2014-05-30 22:50:58
最近总是敲不掉基因(农杆菌转化),都是随机插入了,将农杆菌的质粒提出来转大肠杆菌,竟然大肠杆菌不长了~郁闷中~~试了好多次了

可能是农杆菌质粒表达产物对大肠杆菌有毒害作用,你为什么要提出来转化大肠杆菌啊?
8楼2014-05-31 10:01:18
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清雅风

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by dongge2013 at 2014-05-31 10:01:18
可能是农杆菌质粒表达产物对大肠杆菌有毒害作用,你为什么要提出来转化大肠杆菌啊?...

因为之前用农杆菌转真菌敲真菌的基因,检测的时候感觉总是没有敲掉,都是随机插入的。真菌的表型快七八糟的。就想看看农杆菌里的基因怎么了,就提质粒转大肠杆菌,再拿去测序

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朝着自己的理想奔跑,就是幸福!
9楼2014-05-31 12:33:58
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)


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载体构建中酶连转化总是没有阳性菌,泪崩~

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天道酬勤
10楼2014-05-31 13:17:47
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