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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家说说分子生物学实验经常遇到哪些问题
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xfxycy3090

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[交流] 大家说说分子生物学实验经常遇到哪些问题 已有4人参与

我只想和大家聊聊，没有金币，看看大家都遇到哪些难题？
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1楼 2014-05-29 10:37:01
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
做PCR电泳后跑电泳，目的基因是489BP的，结果每次切胶回收后再跑电泳就变成500多了，快到600了？为什么？
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-29 10:46:02
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清雅风

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近总是敲不掉基因（农杆菌转化），都是随机插入了，将农杆菌的质粒提出来转大肠杆菌，竟然大肠杆菌不长了～郁闷中～～试了好多次了

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朝着自己的理想奔跑，就是幸福！
7楼2014-05-30 22:50:58
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xfxycy3090

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-29 10:46:02
做PCR电泳后跑电泳，目的基因是489BP的，结果每次切胶回收后再跑电泳就变成500多了，快到600了？为什么？

切胶前检测没，是多大
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3楼2014-05-29 10:54:40
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
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3楼: Originally posted by xfxycy3090 at 2014-05-29 10:54:40
切胶前检测没，是多大...

检测了，小于500的
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4楼2014-05-29 10:56:57
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xfxycy3090

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4楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-29 10:56:57
检测了，小于500的...

首先，电泳时间长一点，看PCR扩增是否是一条带；
其次，注意电泳的loading buffer，maker的和PCR的不一样，电泳速率也可能不同；
最后，实在找不出原因，做个TA克隆，测序，看是不是要的序列。
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5楼2014-05-29 13:18:24
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼: Originally posted by xfxycy3090 at 2014-05-29 13:18:24
首先，电泳时间长一点，看PCR扩增是否是一条带；
其次，注意电泳的loading buffer，maker的和PCR的不一样，电泳速率也可能不同；
最后，实在找不出原因，做个TA克隆，测序，看是不是要的序列。...

再联系你，谢谢啦嘿嘿
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
6楼2014-05-29 17:51:42
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dongge2013

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 清雅风 at 2014-05-30 22:50:58
最近总是敲不掉基因（农杆菌转化），都是随机插入了，将农杆菌的质粒提出来转大肠杆菌，竟然大肠杆菌不长了～郁闷中～～试了好多次了

可能是农杆菌质粒表达产物对大肠杆菌有毒害作用，你为什么要提出来转化大肠杆菌啊？
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8楼2014-05-31 10:01:18
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清雅风

木虫 (著名写手)
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8楼: Originally posted by dongge2013 at 2014-05-31 10:01:18
可能是农杆菌质粒表达产物对大肠杆菌有毒害作用，你为什么要提出来转化大肠杆菌啊？...

因为之前用农杆菌转真菌敲真菌的基因，检测的时候感觉总是没有敲掉，都是随机插入的。真菌的表型快七八糟的。就想看看农杆菌里的基因怎么了，就提质粒转大肠杆菌，再拿去测序

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朝着自己的理想奔跑，就是幸福！
9楼2014-05-31 12:33:58
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
★
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载体构建中酶连转化总是没有阳性菌，泪崩~

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天道酬勤
10楼2014-05-31 13:17:47
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