应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 目的片段连上了pEASY-Blunt simple，不知道怎么进行酶切鉴定，求助！
61/1返回列表
查看: 4868  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

[求助] 目的片段连上了pEASY-Blunt simple，不知道怎么进行酶切鉴定，求助！ 已有3人参与

我的目的片段没有设计酶切位点，完全是平末端连上的。载体是pEASY-blunt simple，消除了一些多克隆位点。
  倒是可以提质粒再做，不过我舍友也有没设计酶切位点的，用的是T载体，然后可以设计酶切位点。
  我理解的是，如果在我的目的片段两端有酶切位点，那我就可以用这两个点切。
  但是pEASY-blunt simple里目的片段是插入LacZ里的，我也找不到这个载体的图谱，不知道有没有做过这个的同学？能不能指教一二。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-12 15:43:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

super_mm

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 15:55:43
pEASY Blunt simple主要是用PCR鉴定的，好像连接区没有什么合适的酶切位点，如果你的PCR引物上没加酶切位点，就找不到合适的酶切位点验证了，你用的是全式金的吗？图谱有啊，这里http://www.transgen.com.cn/products/63.html
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-13 11:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 15:55:46
这个载体的mcs被切除啦，你可以用vector看看目的片段插入这个载体附近的酶切位点有哪些再切吧。要不然换个载体，有多克隆位点的。
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-13 11:21:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2014-10-13 11:09:18
pEASY Blunt simple主要是用PCR鉴定的，好像连接区没有什么合适的酶切位点，如果你的PCR引物上没加酶切位点，就找不到合适的酶切位点验证了，你用的是全式金的吗？图谱有啊，这里http://www.transgen.com.cn/produc ...

说明书上的图谱不全呀，说明书上不是还让自己登陆网站查阅酶切位点分析吗？难道是看那个全序列……
  我按说明书用的M13上下游引物，不知道这样鉴定重组子出来的片段是什么样的？因为它不是特异性的P出目的片段，还带有一些载体的序列。
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-13 15:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hmily890404

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我一直都在用这个载体，一直都是用的M13鉴定的。拉出来的载体片段跟你的片段应该不是特别影响，载体片段比较大，4KB左右。用你自己基因里面的酶切位点鉴定也可以。不过我最近连接这个载体出了点问题，之前一连就连上了，最近两次怎么连都连不上，还要请教是个什么情况。。。
赞一下 回复此楼
5楼2015-03-25 14:52:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

何何y

新虫 (初入文坛)
你好，我最近一直连接pEASY-Blunt simple，连不上，你有什么意见吗
赞一下 回复此楼
6楼2017-12-14 12:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ggyy0911 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:25 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:14 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 4/200 2026-11-15 10:08 by xSrQNSSjcgoX
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:40 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 03:43 by xSrQNSSjcgoX
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 10/500 2026-11-15 02:15 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-15 00:24 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 8/400 2026-11-14 22:51 by Equinoxhua
[考博] 考博求助 10+3 社会实践对别 2026-11-08 3/150 2026-11-13 14:04 by 沐小虫252
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 13:02 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:20 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:43 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:21 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:09 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:00 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭