24小时热门版块排行榜    

查看: 4759  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

[求助] 目的片段连上了pEASY-Blunt simple,不知道怎么进行酶切鉴定,求助! 已有3人参与

我的目的片段没有设计酶切位点,完全是平末端连上的。载体是pEASY-blunt simple,消除了一些多克隆位点。
  倒是可以提质粒再做,不过我舍友也有没设计酶切位点的,用的是T载体,然后可以设计酶切位点。
  我理解的是,如果在我的目的片段两端有酶切位点,那我就可以用这两个点切。
  但是pEASY-blunt simple里目的片段是插入LacZ里的,我也找不到这个载体的图谱,不知道有没有做过这个的同学?能不能指教一二。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2014-10-13 11:09:18
pEASY Blunt simple主要是用PCR鉴定的,好像连接区没有什么合适的酶切位点,如果你的PCR引物上没加酶切位点,就找不到合适的酶切位点验证了,你用的是全式金的吗?图谱有啊,这里http://www.transgen.com.cn/produc ...

说明书上的图谱不全呀,说明书上不是还让自己登陆网站查阅酶切位点分析吗?难道是看那个全序列……
  我按说明书用的M13上下游引物,不知道这样鉴定重组子出来的片段是什么样的?因为它不是特异性的P出目的片段,还带有一些载体的序列。
4楼2014-10-13 15:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

super_mm

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 15:55:43
pEASY Blunt simple主要是用PCR鉴定的,好像连接区没有什么合适的酶切位点,如果你的PCR引物上没加酶切位点,就找不到合适的酶切位点验证了,你用的是全式金的吗?图谱有啊,这里http://www.transgen.com.cn/products/63.html
2楼2014-10-13 11:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 15:55:46
这个载体的mcs被切除啦,你可以用vector看看目的片段插入这个载体附近的酶切位点有哪些再切吧。要不然换个载体,有多克隆位点的。
3楼2014-10-13 11:21:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hmily890404

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我一直都在用这个载体,一直都是用的M13鉴定的。拉出来的载体片段跟你的片段应该不是特别影响,载体片段比较大,4KB左右。用你自己基因里面的酶切位点鉴定也可以。不过我最近连接这个载体出了点问题,之前一连就连上了,最近两次怎么连都连不上,还要请教是个什么情况。。。
5楼2015-03-25 14:52:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-31 02:23 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-31 01:38 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-31 01:27 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-31 01:26 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 9/450 2026-08-31 01:05 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-31 00:56 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-31 00:42 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-31 00:21 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 能否申诉? +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 17:25 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
请填处理意见