24小时热门版块排行榜    

查看: 4761  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

[求助] 目的片段连上了pEASY-Blunt simple,不知道怎么进行酶切鉴定,求助! 已有3人参与

我的目的片段没有设计酶切位点,完全是平末端连上的。载体是pEASY-blunt simple,消除了一些多克隆位点。
  倒是可以提质粒再做,不过我舍友也有没设计酶切位点的,用的是T载体,然后可以设计酶切位点。
  我理解的是,如果在我的目的片段两端有酶切位点,那我就可以用这两个点切。
  但是pEASY-blunt simple里目的片段是插入LacZ里的,我也找不到这个载体的图谱,不知道有没有做过这个的同学?能不能指教一二。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 15:55:46
这个载体的mcs被切除啦,你可以用vector看看目的片段插入这个载体附近的酶切位点有哪些再切吧。要不然换个载体,有多克隆位点的。
3楼2014-10-13 11:21:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

super_mm

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 15:55:43
pEASY Blunt simple主要是用PCR鉴定的,好像连接区没有什么合适的酶切位点,如果你的PCR引物上没加酶切位点,就找不到合适的酶切位点验证了,你用的是全式金的吗?图谱有啊,这里http://www.transgen.com.cn/products/63.html
2楼2014-10-13 11:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2014-10-13 11:09:18
pEASY Blunt simple主要是用PCR鉴定的,好像连接区没有什么合适的酶切位点,如果你的PCR引物上没加酶切位点,就找不到合适的酶切位点验证了,你用的是全式金的吗?图谱有啊,这里http://www.transgen.com.cn/produc ...

说明书上的图谱不全呀,说明书上不是还让自己登陆网站查阅酶切位点分析吗?难道是看那个全序列……
  我按说明书用的M13上下游引物,不知道这样鉴定重组子出来的片段是什么样的?因为它不是特异性的P出目的片段,还带有一些载体的序列。
4楼2014-10-13 15:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hmily890404

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我一直都在用这个载体,一直都是用的M13鉴定的。拉出来的载体片段跟你的片段应该不是特别影响,载体片段比较大,4KB左右。用你自己基因里面的酶切位点鉴定也可以。不过我最近连接这个载体出了点问题,之前一连就连上了,最近两次怎么连都连不上,还要请教是个什么情况。。。
5楼2015-03-25 14:52:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见