24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2473  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

蠹鱼

木虫 (正式写手)

[求助] 换载体,pET21a换成pET32a的酶切位点问题已有4人参与

用Nde I 和Hind III 双酶切目的片段以及空载体pET21a,构建了一个重组质粒来表达一个酶,但是至今未表达。可能是那是出现了问题呢?
        我想换个载体,用pET32试一下。Hind III 只有一个酶切位点,可以沿用。但是pET32上有2个Nde I 的切割位点,这样可以吗?会不会切的乱七八糟的?应不应该设计引物,PCR重新构建酶切位点呢?
        刚刚进实验室,恳请大家多多指点。
        另外,我还想换成pBAD质粒,这个酶切位点怎么选,怎么办?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

少一分浮躁,多一分踏实。少一分侥幸,多一分努力。
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-09-30 18:34:09
换成PET-32的话位点可以用的。
学习再学习,努力再努力。
9楼2014-09-29 15:39:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-30 18:34:16
测序没问题换个载体的话估计也没什么多大用处,还是建议摸索一下诱导条件。重新转化下感受态细胞。
学习再学习,努力再努力。
10楼2014-09-29 15:42:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
蠹鱼: 金币+1 2014-09-30 08:45:12
蠹鱼: 金币+2 2014-09-30 08:50:53
引用回帖:
11楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-29 16:02:20
什么意思,直接酶切连接就行?...

恩,可以直接酶切连接的。NdeI 在同一侧,不影响的。
学习再学习,努力再努力。
13楼2014-09-29 16:50:52
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-30 18:34:43
蠹鱼: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-30 19:30:49
引用回帖:
15楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-30 08:50:26
HindIII  1  173
NdeI    2   346  691...

PDF 上传不了,你可以查下PET-32 的图谱,NdeI 之间是一个
Trx•Tag coding sequence 366-692
切掉的话对你没什么影响的。
你用NdeI 和HindIII 酶切保留的是 173 、691 位的位点,中间部分切掉了。所以对你没什么影响的。
学习再学习,努力再努力。
16楼2014-09-30 10:50:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蠹鱼 的主题更新
信息提示
请填处理意见