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钢铁汉子

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 急求助!为什么我用蒽酮比色法测出来的淀粉含量的数值很高,达到了样品含量的98%? 已有4人参与

我用蒽酮比色法测定植物根中的淀粉,测量的方法是参照09年的食品国标,方法如下,请大家帮我看看,有什么问题,为什么测量出来的淀粉含量非常高,90%都湿淀粉。急很急,谢谢大家。
称量样品0.05g用80%乙醇提取三次后点残渣进行水解。
向装有残渣的10 mL离心管(残渣:提取3次可溶性糖的残渣)中加2 mL超纯水。随后,加入5 mL 6 mol/L HCl,60 ℃水解1 h。待试样水解液冷却后,转移至50 mL锥形瓶,然后加入2滴甲基红指示液(PH>4.4红色,4.4<PH<6.2橙红色,PH>6.2黄色),先以5 mol/L NaOH 调成黄色,再以 0.6 mol/L HCl校正至水解液刚好变为橙红色。然后加5 mL 乙酸铅溶液(200 g/L),摇匀,放置10 min。再加5 mLNa2SO4(100 g/L),以除去过量的铅。摇匀后,过滤到100ml容量瓶,定容至100 mL,用1mL移液枪在离心管中间位置吸取上清液用于测定。
取0.1mL待测液+0.9mL超纯水,在加5ml的蒽酮,准确煮沸10min,测量625的吸光度。
大家帮我看看到底是哪一步出来问题?
真的很急,大家多多指教!有什么问题希望大家提出来,多多交流!
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

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钢铁汉子: 金币+1, 有帮助, 我也遇到了类似的问题,但是原因是什么呢 2014-09-29 14:50:22
引用回帖:
5楼: Originally posted by 钢铁汉子 at 2014-09-28 20:14:50
想交流一下,是否和用蒽酮比色法测量糖浓度的时候,加过量蒽酮,温度100°,准确煮沸10分钟,如果加热的时间长,会不会导致吸光度增大呢,是什么原因呢?
看文献都说蒽酮比色法条件控制很苛刻,要准确把握时间和 ...

我遇到的情况也是加热时间越长,吸光值越大,我猜的是10分钟的时间反应不完全。但是严格控制时间的话,不会有测定问题的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2014-09-28 20:27:30
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
钢铁汉子: 金币+1, 有帮助, 多谢帮忙 2014-09-28 09:40:40
蒽酮法测淀粉是把淀粉酸水解后测还原糖,可能是样品中其他组分也会被酸水解产生还原糖。可以尝试特异的测定方法,比如用淀粉酶水解,或者测定淀粉水解的单体葡萄糖,或者用碘给淀粉染色试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-09-28 08:21:03
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钢铁汉子

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-28 08:21:03
蒽酮法测淀粉是把淀粉酸水解后测还原糖,可能是样品中其他组分也会被酸水解产生还原糖。可以尝试特异的测定方法,比如用淀粉酶水解,或者测定淀粉水解的单体葡萄糖,或者用碘给淀粉染色试试。
...

关键是其他物质就水解,影响也不会很大,因该不是主要原因。其中蛋白质是被出除的。并且其中还过滤了,按理论来说糖值应该测得低一些,有一些测定值竟然都超过了100%。是否是操作环节中有什么问题而导致的。麻烦帮忙看一下谢谢
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3楼2014-09-28 09:34:49
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


钢铁汉子: 金币+1, 有帮助, 有帮助 2014-09-28 20:13:04
引用回帖:
3楼: Originally posted by 钢铁汉子 at 2014-09-28 09:34:49
关键是其他物质就水解,影响也不会很大,因该不是主要原因。其中蛋白质是被出除的。并且其中还过滤了,按理论来说糖值应该测得低一些,有一些测定值竟然都超过了100%。是否是操作环节中有什么问题而导致的。麻烦帮 ...

那个,我没看出什么太大的问题,还是觉得是其他杂质引起的。要说可能有问题,就是细节问题,不知道你怎么做的;比如,组织称取的时候能否保证精确,是否有平行实验;乙醇提取后乙醇是否完全挥发掉,乙醇可能会和蒽酮反应;标准曲线的制作,淀粉是否烘干,等等。
4楼2014-09-28 12:45:58
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钢铁汉子

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-28 12:45:58
那个,我没看出什么太大的问题,还是觉得是其他杂质引起的。要说可能有问题,就是细节问题,不知道你怎么做的;比如,组织称取的时候能否保证精确,是否有平行实验;乙醇提取后乙醇是否完全挥发掉,乙醇可能会和蒽 ...

想交流一下,是否和用蒽酮比色法测量糖浓度的时候,加过量蒽酮,温度100°,准确煮沸10分钟,如果加热的时间长,会不会导致吸光度增大呢,是什么原因呢?
看文献都说蒽酮比色法条件控制很苛刻,要准确把握时间和温度,我实验中发现,加热时间过长会导致吸光度增大,这是什么原因啊,是产生了什么副作用吗?那到底是什么物质导致吸光度增大的?
有些路总要有人走,就算工作再忙,也不要忘记生活的情趣。人生有限,活在当下,大家开心!
5楼2014-09-28 20:14:50
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钢铁汉子

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-28 20:27:30
我遇到的情况也是加热时间越长,吸光值越大,我猜的是10分钟的时间反应不完全。但是严格控制时间的话,不会有测定问题的。
...

我看的几乎所有的文献,以及实验指导上,加热煮沸的时间都是10分钟,有的更少。没人说有这个问题吗?
有些路总要有人走,就算工作再忙,也不要忘记生活的情趣。人生有限,活在当下,大家开心!
7楼2014-09-29 14:51:40
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 钢铁汉子 at 2014-09-29 14:51:40
我看的几乎所有的文献,以及实验指导上,加热煮沸的时间都是10分钟,有的更少。没人说有这个问题吗?...

我们是做生命科学研究的,别在意这些,也许不是问题,只是我们不知道。按照成熟的方法测定就好了。
8楼2014-09-29 14:54:00
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钢铁汉子

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-29 14:54:00
我们是做生命科学研究的,别在意这些,也许不是问题,只是我们不知道。按照成熟的方法测定就好了。...

哎,有时候我们不能按照一些成熟的方法来做,你懂得
有些路总要有人走,就算工作再忙,也不要忘记生活的情趣。人生有限,活在当下,大家开心!
9楼2014-09-30 09:36:20
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 钢铁汉子 at 2014-09-30 09:36:20
哎,有时候我们不能按照一些成熟的方法来做,你懂得...

为什么?我不懂诶……
10楼2014-09-30 11:13:11
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