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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 急求助！为什么我用蒽酮比色法测出来的淀粉含量的数值很高，达到了样品含量的98%？
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钢铁汉子

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 急求助！为什么我用蒽酮比色法测出来的淀粉含量的数值很高，达到了样品含量的98%？ 已有4人参与

我用蒽酮比色法测定植物根中的淀粉，测量的方法是参照09年的食品国标，方法如下，请大家帮我看看，有什么问题，为什么测量出来的淀粉含量非常高，90%都湿淀粉。急很急，谢谢大家。
称量样品0.05g用80%乙醇提取三次后点残渣进行水解。
向装有残渣的10 mL离心管（残渣：提取3次可溶性糖的残渣）中加2 mL超纯水。随后，加入5 mL 6 mol/L HCl，60 ℃水解1 h。待试样水解液冷却后，转移至50 mL锥形瓶，然后加入2滴甲基红指示液（PH>4.4红色，4.4<PH<6.2橙红色，PH>6.2黄色），先以5 mol/L NaOH 调成黄色，再以 0.6 mol/L HCl校正至水解液刚好变为橙红色。然后加5 mL 乙酸铅溶液（200 g/L），摇匀，放置10 min。再加5 mLNa2SO4（100 g/L），以除去过量的铅。摇匀后，过滤到100ml容量瓶，定容至100 mL，用1mL移液枪在离心管中间位置吸取上清液用于测定。
取0.1mL待测液+0.9mL超纯水，在加5ml的蒽酮，准确煮沸10min，测量625的吸光度。
大家帮我看看到底是哪一步出来问题？
真的很急，大家多多指教！有什么问题希望大家提出来，多多交流！
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有些路总要有人走，就算工作再忙，也不要忘记生活的情趣。人生有限，活在当下，大家开心！
1楼 2014-09-27 21:13:47
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
钢铁汉子: 金币+1, ★有帮助, 有帮助 2014-09-28 20:13:04
引用回帖:
3楼: Originally posted by 钢铁汉子 at 2014-09-28 09:34:49
关键是其他物质就水解，影响也不会很大，因该不是主要原因。其中蛋白质是被出除的。并且其中还过滤了，按理论来说糖值应该测得低一些，有一些测定值竟然都超过了100%。是否是操作环节中有什么问题而导致的。麻烦帮 ...

那个，我没看出什么太大的问题，还是觉得是其他杂质引起的。要说可能有问题，就是细节问题，不知道你怎么做的；比如，组织称取的时候能否保证精确，是否有平行实验；乙醇提取后乙醇是否完全挥发掉，乙醇可能会和蒽酮反应；标准曲线的制作，淀粉是否烘干，等等。
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4楼2014-09-28 12:45:58
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
钢铁汉子: 金币+1, ★有帮助, 多谢帮忙 2014-09-28 09:40:40
蒽酮法测淀粉是把淀粉酸水解后测还原糖，可能是样品中其他组分也会被酸水解产生还原糖。可以尝试特异的测定方法，比如用淀粉酶水解，或者测定淀粉水解的单体葡萄糖，或者用碘给淀粉染色试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-28 08:21:03
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钢铁汉子

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-28 08:21:03
蒽酮法测淀粉是把淀粉酸水解后测还原糖，可能是样品中其他组分也会被酸水解产生还原糖。可以尝试特异的测定方法，比如用淀粉酶水解，或者测定淀粉水解的单体葡萄糖，或者用碘给淀粉染色试试。
...

关键是其他物质就水解，影响也不会很大，因该不是主要原因。其中蛋白质是被出除的。并且其中还过滤了，按理论来说糖值应该测得低一些，有一些测定值竟然都超过了100%。是否是操作环节中有什么问题而导致的。麻烦帮忙看一下谢谢
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3楼2014-09-28 09:34:49
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钢铁汉子

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-28 12:45:58
那个，我没看出什么太大的问题，还是觉得是其他杂质引起的。要说可能有问题，就是细节问题，不知道你怎么做的；比如，组织称取的时候能否保证精确，是否有平行实验；乙醇提取后乙醇是否完全挥发掉，乙醇可能会和蒽 ...

想交流一下，是否和用蒽酮比色法测量糖浓度的时候，加过量蒽酮，温度100°，准确煮沸10分钟，如果加热的时间长，会不会导致吸光度增大呢，是什么原因呢？
看文献都说蒽酮比色法条件控制很苛刻，要准确把握时间和温度，我实验中发现，加热时间过长会导致吸光度增大，这是什么原因啊，是产生了什么副作用吗？那到底是什么物质导致吸光度增大的？
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5楼2014-09-28 20:14:50
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