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sinky熹

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 多重PCR敏感性实验已有1人参与

不知道大家有没有优化过多重PCR的反应条件。我刚开始做多重，用的是tag-PCR扩增两轮的方法。在进行质粒敏感性检测时发现第二轮PCR后低浓度模板对应的PCR产物均拖尾了，高浓度模板对应的PCR产物均正常，请问大家知道这是什么原因吗？我该怎么优化？

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1楼 2014-09-25 13:51:12

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sinky熹

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-09-25 14:09:40
多重PCR是指一个反应体系中同时扩增多条目的条带，你这个实验确定是做多重PCR吗？多重PCR的关键在于选择合适的热启动酶，减少非特异性扩增和引物二聚体的生成。自己优化需要很长时间，而且需要测试很多种酶。不如自 ...

是多重PCR，但是怎么说呢，这个体系是同时检测很多临床上的突变，一般病人只有一种突变，所以PCR检测时只出一个带，我们平时用质粒做模板检测时也是只加一种突变模板。能介绍下多重PCR试剂盒吗？引物比例和温度是要自己摸的吧？