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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 多重PCR敏感性实验
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sinky熹

铜虫 (初入文坛)

[求助] 多重PCR敏感性实验 已有1人参与

不知道大家有没有优化过多重PCR的反应条件。我刚开始做多重，用的是tag-PCR扩增两轮的方法。在进行质粒敏感性检测时发现第二轮PCR后低浓度模板对应的PCR产物均拖尾了，高浓度模板对应的PCR产物均正常，请问大家知道这是什么原因吗？我该怎么优化？
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1楼 2014-09-25 13:51:12
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sinky熹

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-09-25 14:09:40
多重PCR是指一个反应体系中同时扩增多条目的条带，你这个实验确定是做多重PCR吗？多重PCR的关键在于选择合适的热启动酶，减少非特异性扩增和引物二聚体的生成。自己优化需要很长时间，而且需要测试很多种酶。不如自 ...

是多重PCR，但是怎么说呢，这个体系是同时检测很多临床上的突变，一般病人只有一种突变，所以PCR检测时只出一个带，我们平时用质粒做模板检测时也是只加一种突变模板。能介绍下多重PCR试剂盒吗？引物比例和温度是要自己摸的吧？
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3楼2014-09-25 15:47:07
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-25 20:59:20
多重PCR是指一个反应体系中同时扩增多条目的条带，你这个实验确定是做多重PCR吗？多重PCR的关键在于选择合适的热启动酶，减少非特异性扩增和引物二聚体的生成。自己优化需要很长时间，而且需要测试很多种酶。不如自己直接买相关产品，很多公司有多重PCR试剂盒。
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rainwater
2楼2014-09-25 14:09:40
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shunfeng12

铜虫 (初入文坛)
你好，你用的是普通的Taq酶？现在扩的怎么样？
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4楼2014-11-01 11:12:59
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