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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR非常非常奇特的一个问题，寻高人解决菜鸟的困惑。
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sunnjjian

金虫 (小有名气)

[求助] PCR非常非常奇特的一个问题，寻高人解决菜鸟的困惑。 已有5人参与

各位大神，我最近在做亚克隆，设计了好几对引物，目的带为711bp, 而PCR产物为1300bp左右，于是送去测序发现一个奇特的现象，1300bp中的两小段正是我要的序列中的一部分，有一段还是反向互补的，除去这两段序列将其他序列NCBI blast啥玩意也不是。也找不到我引物序列，请高人指点这是咋回事啊。
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1楼 2014-09-24 20:14:17
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yunshenglmm

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据我的经验，我认为你pcr的模板有问题，如果是用质粒做模板，我猜测你可能把基因连反了，可能把克隆质粒扩出来了
另外，PCR退火温度应尽量高一点，以防止非特异扩增
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5楼2014-09-25 22:57:08
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sunnjjian

金虫 (小有名气)
怎么木有人回答啊
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2楼2014-09-24 20:27:47
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494750284

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
的确很有意思。我是菜鸟，但是想问几个小问题
1、这两小段包不包含引物序列？
2、这两小段有多长，是不是基因组中的长重复序列？
3、模板的DNA还是cDNA？
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3楼2014-09-25 12:15:28
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学习分子生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 494750284 at 2014-09-25 12:15:28
的确很有意思。我是菜鸟，但是想问几个小问题
1、这两小段包不包含引物序列？
2、这两小段有多长，是不是基因组中的长重复序列？
3、模板的DNA还是cDNA？

会不会扩的是杂带呀

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-09-25 16:34:19
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