应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR非常非常奇特的一个问题，寻高人解决菜鸟的困惑。
71/1返回列表
查看: 1091  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sunnjjian

金虫 (小有名气)

[求助] PCR非常非常奇特的一个问题，寻高人解决菜鸟的困惑。 已有5人参与

各位大神，我最近在做亚克隆，设计了好几对引物，目的带为711bp, 而PCR产物为1300bp左右，于是送去测序发现一个奇特的现象，1300bp中的两小段正是我要的序列中的一部分，有一段还是反向互补的，除去这两段序列将其他序列NCBI blast啥玩意也不是。也找不到我引物序列，请高人指点这是咋回事啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-24 20:14:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnjjian

金虫 (小有名气)
怎么木有人回答啊
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-24 20:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

494750284

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
的确很有意思。我是菜鸟，但是想问几个小问题
1、这两小段包不包含引物序列？
2、这两小段有多长，是不是基因组中的长重复序列？
3、模板的DNA还是cDNA？
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-25 12:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学习分子生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 494750284 at 2014-09-25 12:15:28
的确很有意思。我是菜鸟，但是想问几个小问题
1、这两小段包不包含引物序列？
2、这两小段有多长，是不是基因组中的长重复序列？
3、模板的DNA还是cDNA？

会不会扩的是杂带呀

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-25 16:34:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunshenglmm

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据我的经验，我认为你pcr的模板有问题，如果是用质粒做模板，我猜测你可能把基因连反了，可能把克隆质粒扩出来了
另外，PCR退火温度应尽量高一点，以防止非特异扩增
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-25 22:57:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉是模板有问题。
赞一下 回复此楼
学习再学习，努力再努力。
6楼2014-09-26 10:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序仪测序的时候，序列开头的50bp左右是测不出来的，或者说开头那段测出来可信度很低，一般都省略掉。正常情况下引物是不会出现在测序结果里的，目前的测序仪一般都用“边合成边测序”的原理测序，引物在反应前就已经合成好了，根本测不出来。
目的片段长度是700多，实际扩增1300，这种情况一般都会认为引物特异性不好，不会送测序。测序结果出现的情况的确很奇特，要分析的话首先要看你做PCR用了什么模版，如果是质粒模版，那扩增到blast比不出的序列也不算异常，也有可能是模版本身就有问题，PCR出来的片段本来就是这样的。然后看看1300的片段里和你预想片段对应得上的两个片段是不是连在一起的，还有它们的长度有多长，匹配程度是不是100%等等。再就是看测序公司了，也有可能是测序公司搞错了。
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-26 12:11:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunnjjian 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 7K1CJE38xLG4 2026-08-25 4/200 2026-08-26 02:04 by cNXvBfCpiZOM
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 7K1CJE38xLG4 2026-08-25 4/200 2026-08-26 02:04 by cNXvBfCpiZOM
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +17 木水思豆 2026-08-25 20/1000 2026-08-26 01:26 by chengyan1220
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +18 angus9576 2026-08-25 22/1100 2026-08-26 00:41 by merchancy
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭