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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sunnjjian

金虫 (小有名气)

[求助] PCR非常非常奇特的一个问题,寻高人解决菜鸟的困惑。 已有5人参与

各位大神,我最近在做亚克隆,设计了好几对引物,目的带为711bp, 而PCR产物为1300bp左右,于是送去测序发现一个奇特的现象,1300bp中的两小段正是我要的序列中的一部分,有一段还是反向互补的,除去这两段序列将其他序列NCBI blast啥玩意也不是。也找不到我引物序列,请高人指点这是咋回事啊。
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494750284

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
的确很有意思。我是菜鸟,但是想问几个小问题
1、这两小段包不包含引物序列?
2、这两小段有多长,是不是基因组中的长重复序列?
3、模板的DNA还是cDNA?
3楼2014-09-25 12:15:28
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sunnjjian

金虫 (小有名气)

怎么木有人回答啊
2楼2014-09-24 20:27:47
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学习分子生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 494750284 at 2014-09-25 12:15:28
的确很有意思。我是菜鸟,但是想问几个小问题
1、这两小段包不包含引物序列?
2、这两小段有多长,是不是基因组中的长重复序列?
3、模板的DNA还是cDNA?

会不会扩的是杂带呀

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-09-25 16:34:19
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yunshenglmm

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
根据我的经验,我认为你pcr的模板有问题,如果是用质粒做模板,我猜测你可能把基因连反了,可能把克隆质粒扩出来了
另外,PCR退火温度应尽量高一点,以防止非特异扩增
5楼2014-09-25 22:57:08
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