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新虫 (初入文坛)

[求助] 肠球菌LB摇菌OD600上不去已有1人参与

最近在做肠球菌,需要大量增菌,使OD600达到1.7。看文献用BHI摇菌,但实验室只有LB,所以用LB进行,但测试发现无论摇多长时间,无论加入的菌量是否增加,或者增大空白LB,OD600最大都不超过0.7。取1ML预培养菌液加入100ML的LB中,发现从第7个小时OD600就开始往下跌,从0.6跌到0.4或者0.5左右。持续37℃,200rmp摇菌至24小时再测,发现OD600依然只有0.5左右。看文献报道,如果用BHI,8小时左右OD600就能达到1.8左右。虽然不同的培养基细菌的生长曲线不一样,或者真的肠球菌在LB中OD6001.7不能? 然后说OD600是用来评估菌体细胞密度的,想请教该值除了评估细菌的生长状态,如果只是通过调大菌量调高OD600值是不是失去了OD600本来评估细菌生长状态的意义。谢谢!
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新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by 547star at 2014-09-11 02:26:28
摇瓶装少点培养基,100ml养不了高的情况下,装50ml甚至25ml试试。

我之前有试过小管摇菌,5ml的管子,加入两个菌落摇,依然最高只有0.7。昨天换了MH肉汤摇,24小时OD600约有1.0左右,同时换了另一种肉汤,12小时长到了1.2左右。觉着除了培养基的影响,接种的菌液量可是因素。谢谢回复!
3楼2014-09-11 11:06:48
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新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by wzy云 at 2014-09-11 19:58:51
你这个是从液态直接接到液态吗?你可以试试先涂平板,从平板上接种中到瓶中。

之前小管摇菌的时候是直接从板子上挑取3~5个菌落接种到5ML的LB中的,菌是刚转的,新鲜的那种,但和液体接种效果一致,最多OD600不超过0.7。
5楼2014-09-11 21:40:21
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新虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by sunqingfeng1 at 2014-09-13 14:16:21
培养基的影响还是很大的。我们做抗生素的,培养基配方不一样,效价差的不是一点半点的。因为对菌种对培养基的喜好不同,或者培养基中少了某种物质就不能诱导表达某种酶,对菌种生长影响很大。

确实培养基的影响蛮大的,同样用BHI,在加入马血清后肠球菌的生长曲线有明显的变化,最高OD600能瞬间从2.0跌倒1.2。
7楼2014-09-14 21:54:51
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