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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 肠球菌LB摇菌OD600上不去
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kstage

新虫 (初入文坛)

[求助] 肠球菌LB摇菌OD600上不去已有1人参与

最近在做肠球菌，需要大量增菌，使OD600达到1.7。看文献用BHI摇菌，但实验室只有LB，所以用LB进行，但测试发现无论摇多长时间，无论加入的菌量是否增加，或者增大空白LB，OD600最大都不超过0.7。取1ML预培养菌液加入100ML的LB中，发现从第7个小时OD600就开始往下跌，从0.6跌到0.4或者0.5左右。持续37℃，200rmp摇菌至24小时再测，发现OD600依然只有0.5左右。看文献报道，如果用BHI，8小时左右OD600就能达到1.8左右。虽然不同的培养基细菌的生长曲线不一样，或者真的肠球菌在LB中OD6001.7不能？ 然后说OD600是用来评估菌体细胞密度的，想请教该值除了评估细菌的生长状态，如果只是通过调大菌量调高OD600值是不是失去了OD600本来评估细菌生长状态的意义。谢谢！
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1楼2014-09-10 17:31:29
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kstage: 金币+5, ★有帮助, 2 2014-09-11 11:09:35
摇瓶装少点培养基，100ml养不了高的情况下，装50ml甚至25ml试试。
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为什么
2楼2014-09-11 02:26:28
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kstage

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2014-09-11 02:26:28
摇瓶装少点培养基，100ml养不了高的情况下，装50ml甚至25ml试试。

我之前有试过小管摇菌，5ml的管子，加入两个菌落摇，依然最高只有0.7。昨天换了MH肉汤摇，24小时OD600约有1.0左右，同时换了另一种肉汤，12小时长到了1.2左右。觉着除了培养基的影响，接种的菌液量可是因素。谢谢回复！
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3楼2014-09-11 11:06:48
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wzy云

新虫 (初入文坛)
你这个是从液态直接接到液态吗？你可以试试先涂平板，从平板上接种中到瓶中。
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4楼2014-09-11 19:58:51
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kstage

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzy云 at 2014-09-11 19:58:51
你这个是从液态直接接到液态吗？你可以试试先涂平板，从平板上接种中到瓶中。

之前小管摇菌的时候是直接从板子上挑取3~5个菌落接种到5ML的LB中的，菌是刚转的，新鲜的那种，但和液体接种效果一致，最多OD600不超过0.7。
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5楼2014-09-11 21:40:21
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sunqingfeng1

金虫 (小有名气)
培养基的影响还是很大的。我们做抗生素的，培养基配方不一样，效价差的不是一点半点的。因为对菌种对培养基的喜好不同，或者培养基中少了某种物质就不能诱导表达某种酶，对菌种生长影响很大。
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发酵小家
6楼2014-09-13 14:16:21
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kstage

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sunqingfeng1 at 2014-09-13 14:16:21
培养基的影响还是很大的。我们做抗生素的，培养基配方不一样，效价差的不是一点半点的。因为对菌种对培养基的喜好不同，或者培养基中少了某种物质就不能诱导表达某种酶，对菌种生长影响很大。

确实培养基的影响蛮大的，同样用BHI，在加入马血清后肠球菌的生长曲线有明显的变化，最高OD600能瞬间从2.0跌倒1.2。
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7楼2014-09-14 21:54:51
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