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海之韵-哈哈银虫 (小有名气)
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知道蛋白氨基酸序列，如何克隆编码该蛋白的基因？ 已有3人参与
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| 现在知道蛋白氨基酸序列，通过什么方法可以得到该蛋白对应的基因序列？请各位大侠指点迷津。 |
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2楼2014-09-03 14:53:36
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3楼2014-09-03 14:58:07
【答案】应助回帖
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1. 不知你的氨基酸序列是如何得到的？既然有氨基酸序列应该对这个东西的相关信息有些了解才对啊（如DNA序列），难道你的氨基酸序列是一种假想蛋白？ 2.可以把氨基酸序列在NCBI数据库中进行BLAST,地址如下：http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Bl ... ;LINK_LOC=blasthome；如果你的蛋白不是未知蛋白或假想蛋白说不定能搜到它到底是什么东西包括其DNA序列。 |
4楼2014-09-03 15:53:17
5楼2014-09-03 17:24:29
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6楼2014-09-17 10:25:54
【答案】应助回帖
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1. 首先，将你测得的蛋白质氨基酸序列利用NCBI进行BLAST,网址为：http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Bl ... ;LINK_LOC=blasthome，把氨基酸序列黏贴进去，因为你的蛋白来源物种已知，在搜索结果中看其是什么蛋白，同时也能看到编码此蛋白的核苷酸序列； 2.通过比对得到的编码序列设计PCR引物，同时看你的蛋白的编码基因是否为断裂基因（即跨内含子），如果是，则提取总RNA，逆转录成cDNA，以此cDNA为模板，进行PCR扩增得到目的基因；如果此蛋白的编码基因为非断裂基因，则直接提基因组DNA，作为模板进行PCR扩增得到目的基因。 |
7楼2014-09-18 16:05:52
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