| 查看: 734 | 回复: 3 | ||
[求助]
启动子克隆前的PCR问题 已有1人参与
|
|
用的是高保真酶扩增的，目标产物大小在1500左右，选用梯度PCR，梯度为50-60度，所选的温度比引物单上的已经小了很多，是去除前端之后重新计算的退火温度，但是为什么这样还是扩增不出来？Marker 是用DL5000 扩增的体系是（单位：微升）： 5*Primer Star Buffer 5 dNTP Mix 2 Primer 1+1 cDNA 1.5 e 0.25 水 13.75 扩增程序： 98 3min 98 10s 50-60 15s 72 2min 72 10min 循环数是30  13448-16081.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有246人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 合成的引物该怎么处理，用超纯水还是什么稀释？
已经有3人回复
- 已知一个启动子序列，怎么知道它是否为特异性的？
已经有14人回复
- 请问如何判定是否为启动子序列呢？用什么软件分析？
已经有3人回复
- 引物设计——下游引物是否需要考虑阅读框问题
已经有6人回复
- 多克隆酶切位点可以任意插入基因吗？不用考虑启动子的距离吗？
已经有8人回复
- 关于启动子融合载体的构建
已经有3人回复
- TAIL-PCR克隆基因的启动子
已经有15人回复
- 关于克隆植物基因启动子序列？
已经有4人回复
- 高GC含量基因片段PCR问题
已经有13人回复
- 如何确定启动子
已经有16人回复
- 【求助/交流】5‘UTR的问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】关于启动子区域克隆
已经有11人回复
- 【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题
已经有21人回复
- 【求助/交流】基因组中克隆启动子
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于体外转录的模板
已经有8人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
- 怎样克隆抗性基因及其启动子
已经有8人回复
2楼2014-09-02 12:29:23
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-09-02 15:37:48
梅子清酒: 金币+2, ★有帮助, 恩！找到原因了，重新反转录了cDNA，这个东西很奇怪，之前合成的cDNA没有冻融过，但就是用不了。 2014-09-04 11:42:20
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-09-02 15:37:48
梅子清酒: 金币+2, ★有帮助, 恩！找到原因了，重新反转录了cDNA，这个东西很奇怪，之前合成的cDNA没有冻融过，但就是用不了。 2014-09-04 11:42:20
|
遇到很难解决的问题的时候，只能一项一项的分析排除： 1，模板问题，是不是模板存在阻碍PCR的成分； 2，引物问题，是不是引物设计不合理； 3，taq酶问题，是不是taq酶对于反应程序有特殊的要求； 4，操作问题，是不是有一些操作的细节还没注意。 这4个问题是常见的PCR问题，如果能够将模板/引物/taq/操作都一一确定无误，那么必定能够P出来。 希望实验成功。 |
3楼2014-09-02 13:53:52
4楼2014-09-04 11:41:31
