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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 超滤浓缩问题
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朽木天目

金虫 (初入文坛)

[求助] 超滤浓缩问题 已有5人参与

最近在用密理博30kd超滤膜包对高浓度蛋白样品进行超滤时发现有近15%的样品损失，之前在低浓度下损失不明显，这是什么原因呢？是产生聚合物堵在膜包里了还是其他什么原因？求大神解答！
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1楼 2014-08-20 16:01:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jpfwx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你超完用缓冲液循环冲洗膜包了么？估计是样品浓度太大，在膜包里残留很多。
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年轻，拼搏
2楼2014-08-20 16:12:53
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木海星云

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白样品分子量多大？若是50kd以下都会有不同程度的遗漏。另外测定蛋白浓度的方法是否都是准确一致的？
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6楼2014-08-21 09:45:49
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木海星云

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 朽木天目 at 2014-08-21 10:16:39
分子量大于100kd，测定浓度使用的是紫外分光光度计，方法应该不会有问题...

测定蛋白浓度较准确的方法属BCA法，若是用的A280，这个方法很不准确，不能用于准确定量。
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8楼2014-08-25 13:33:21
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salanero2000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议可以测定一下水通量，如果膜包有堵塞导致压力变化是会损失增加的。
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9楼2014-08-27 10:16:59
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elise1987

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
朽木天目: 金币+10, ★有帮助 2014-09-05 15:06:16
损失是15%，一般不应该是膜破了，只能说是漏掉了一些或者被膜吸附。
选取截留分子的1/3~1/5之间是没有问题的。
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不折腾，不胡闹，珍惜时间和生命
10楼2014-08-28 16:41:46
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普通回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些分子也能漏出超滤膜包的

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-08-20 20:39:18
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朽木天目

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jpfwx at 2014-08-20 16:12:53
你超完用缓冲液循环冲洗膜包了么？估计是样品浓度太大，在膜包里残留很多。

肯定是冲洗了，而且冲洗液也检测不出蛋白
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4楼2014-08-21 09:15:48
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朽木天目

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-20 20:39:18
有些分子也能漏出超滤膜包的

滤出端也测过，确定没有蛋白样品
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5楼2014-08-21 09:16:16
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朽木天目

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 木海星云 at 2014-08-21 09:45:49
蛋白样品分子量多大？若是50kd以下都会有不同程度的遗漏。另外测定蛋白浓度的方法是否都是准确一致的？

分子量大于100kd，测定浓度使用的是紫外分光光度计，方法应该不会有问题
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7楼2014-08-21 10:16:39
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