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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 夹心ELISA方法的建立及酶标单抗
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] 夹心ELISA方法的建立及酶标单抗 已有6人参与

本人一直在建定量夹心ELISA方法：双抗体夹心检抗原，但是阴性、空白值很高。阳性OD=1.3,阴性=0.46，先头觉得是封闭液问题，尝试过几种封闭液：脱脂乳，BSA,明胶，马血清。但都没有明显改变。再想是不是本人标记单抗出现问题了，
    酶标单抗是用改良的过碘酸钠法将HRP标记到单抗上，我再想是不是酶标单抗溶液中有未结合的游离HRP，在建夹心ELISA方法的过程中，游离的HRP结合到板子上，引起非特异性结合。请做过的前辈给予指点，谢谢
    怎样去除游离的HRP，我的酶标抗体有的是用50%的甘油保存的，有的是50微升分装保存的。
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微笑，自信，加油
1楼 2014-08-12 15:18:16
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sfeqhl

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-19 10:24:39
谢谢露珠！我已经标记好了，步骤稍微有点不一样，不过也都差不多。
我用饱和硫酸铵等体积沉淀纯化了两次，你纯化一次可能还有游离的HRP吧。我把第一次纯化的上清也拿来做滴定了，有轻微的显色，OD最大不到0.3，酶 ...

应该是终浓度40%吧。20%太低了

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2014-11-19 18:02:09
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可儿不苦

金虫 (著名写手)
楼主，你的标记步骤可否告知？ 我接下来的实验可能要用HRP标记单抗
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幸福那一个美梦，是二人同行才有。
2楼2014-09-09 15:33:36
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ahchljctw

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主，我也做双抗体夹心检测抗原，阳性OD差异性太大了，不稳定，同一个抗原，多次重复的检测结果大于10%，还有标准品的OD差异也大，但是R方很好0.99 .求教什么原因
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Stayhungry,stayfoolish
3楼2014-10-17 00:20:02
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ahchljctw at 2014-10-17 00:20:02
楼主，我也做双抗体夹心检测抗原，阳性OD差异性太大了，不稳定，同一个抗原，多次重复的检测结果大于10%，还有标准品的OD差异也大，但是R方很好0.99 .求教什么原因

你做的比我快，我刚出来标准曲线。不稳定的话，封闭液中加1%蔗糖你再试试，起到保护包被蛋白的作用。
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微笑，自信，加油
4楼2014-11-19 09:28:38
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