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st.nova2012

新虫 (小有名气)

[求助] ELISA 第一次测能测出,第二次测不出? 已有4人参与

各位同志大家好。
我现在是用ELISA测小鼠血浆中的IL-1beta,买的国产试剂盒。
开封后第一次测,样品是能测出来的,浓度在标曲范围内。
因为结果不好,一周后又重复了一次,第二次的血浆是实验前两天新取的血浆,分离后冻存在-80℃,取出后在4℃下解冻,按说明书要求实验。
结果,我的标曲没问题,但所有的样品孔吸光度都跟空白空差不多,根本没法计算,跟第一次的吸光度差很多。
不知道大家在实验中有没有遇到这种情况。
因为是第一次没用完,未用的孔是密封在4℃的(这个是按说明书),实验时随意安置在架子上,所以不应该是试剂盒材料出了问题。
但样品是跟第一次一样操作的,离心,冻存,解冻条件都一样。
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

国产的ELISA试剂盒你也敢用
5楼2014-08-13 16:32:52
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普通回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是否样品稀释过程中搞错了,样品稀释到了检测限度以下。否则应该会有吸光度,不至于什么都没有。
2楼2014-08-12 11:11:59
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st.nova2012

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-08-12 11:11:59
是否样品稀释过程中搞错了,样品稀释到了检测限度以下。否则应该会有吸光度,不至于什么都没有。

没有稀释,血浆直接加样的
3楼2014-08-12 12:19:44
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
标曲没问题的话,说明就是样本的原因了。有没有第一次检测过的样本再检测一次做个对照呢?
4楼2014-08-13 13:47:48
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st.nova2012

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by berniehuang at 2014-08-13 13:47:48
标曲没问题的话,说明就是样本的原因了。有没有第一次检测过的样本再检测一次做个对照呢?

样本比较少,第一次的测完了,又做了一批动物,新采集的血浆。
6楼2014-08-13 18:21:04
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st.nova2012

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-08-13 16:32:52
国产的ELISA试剂盒你也敢用

进口的贵死爹啦,老板没钱,不舍的这么花啊
7楼2014-08-13 18:21:37
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

国产的不一定不好啊,我用过联科的就挺好,而且有详细的参数(回收率、灵敏度、样本值、特异性等等)。有的劣质的或假的国产试剂盒,看看说明书和包装盒就觉得不靠谱了。
8楼2014-08-14 08:50:39
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by st.nova2012 at 2014-08-13 18:21:37
进口的贵死爹啦,老板没钱,不舍的这么花啊...

IL-1beta和TNFalpha、IL-6都属于炎症因子,这类因子在空白小鼠血清或血浆中的含量是很低的,我用过eBioscience的ELISA盒子测BALB/C 血清的TNFalpha和IL-6都没测出来,用所谓的RD分装的国产盒子测出来有颜色,反正我是不相信这个结果的。
9楼2014-08-14 10:36:21
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-08-14 10:36:21
IL-1beta和TNFalpha、IL-6都属于炎症因子,这类因子在空白小鼠血清或血浆中的含量是很低的,我用过eBioscience的ELISA盒子测BALB/C 血清的TNFalpha和IL-6都没测出来,用所谓的RD分装的国产盒子测出来有颜色,反正我 ...

R&D发表过声明,明确表示没有分装产品。所以所谓的R&D分装百分之百都是假货。
10楼2014-08-20 17:23:15
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