| 查看: 2153 | 回复: 24 | |||||||||||||||||||
[求助]
请帮忙分析一下，非常感谢~已有7人参与
|
|||||||||||||||||||
|
各位好，小弟近来在做质粒构建，遇到一些问题，请赐教~ 原始质粒是从菌液里提出来的pET-28a；目的片段2200左右，上下游引物5'端分别加的是Bamh I和Ecor I的酶切位点，然后也都加好了Neb那张表格的保护碱基，都加了3个保护碱基，PCR条带也都正确，并割胶回收。 然后，质粒和目的片段37度4h双酶切，酶切体系12ul DNA；2ul Buffer K；4.4ul ddH20；0.8ul Bamh I；0.8ul Ecor I，电泳如图1，最左面的是2000的Marker，最右面的是原始质粒。 接着割胶回收，如图2，取割胶回收6.5ul 目的片段和1.5ul 质粒，再加1ul buffer和1ul 连接酶，16度连接20个小时，然后就做转化，感受态效率还可以，明天过来，长了30个左右，晚上接菌，并且在抗生素的培养基里都长了。 但是今天提质粒又是没提出来，已经做了好几次了，这是为什么？试剂盒、限制酶和连接酶都是用的Takara的。 看了原始质粒pET-28a的Bamh I和Ecor I的酶切位点是紧挨着的，是不是不能双酶切？ 请不吝赐教，非常感谢~  双酶切产物.gif  双酶切割胶回收.gif |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有136人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请大家帮忙分析一下！第二次投稿，AE给reject，主编给major revision.
已经有13人回复
- 求各位大神帮忙解释一下审稿人的评论，小硕不太理解，非常感谢~~~
已经有7人回复
- 求丝网印刷的虫友们帮忙分析一下，非常感谢
已经有7人回复
- 本人谱图菜鸟，各位大神帮帮我解析一下是不是目标化合物，非常感谢！急
已经有11人回复
- 各位前辈，帮忙分析下，导师这样回复是什么意思，万分感激
已经有16人回复
- 请帮忙分析一下，该用什么材料，什么热处理方式
已经有11人回复
- 求助求助，急啊，请各位虫友帮忙翻一下评审的这句话，非常感谢
已经有4人回复
- 请有经验的哥哥姐姐帮忙看一下这段英文，非常感谢。
已经有6人回复
- 新手一枚，大家帮忙分析一下我的高效液相图谱。O(∩_∩)O谢谢
已经有8人回复
- 麻烦各位虫友帮忙解析一下 3.29 处是什么出峰，非常感谢~~
已经有11人回复
- 请帮忙分析下XRD数据，这两天软件出问题，只分析了一半。非常紧急！十分感谢！
已经有10人回复
- 想查看自己的账户和密码，帮忙分析一下这是什么情况？
已经有11人回复
- 请高手帮忙分析一下SiO2-Al2O3的TG-DTA曲线，非常感谢！
已经有7人回复
- 帮忙分析一下这几个响应面的图
已经有16人回复
- 这个GC太诡异了，大家帮忙分析下原因，感谢。。。
已经有21人回复
- 求大家帮忙分析下这个CV曲线吧
已经有10人回复
- 刚投就被拒稿，请高手帮忙分析一下
已经有18人回复
- 帮忙分析一下这个tafel曲线，急~~~谢谢！
已经有10人回复
- 帮忙分析一下PDMAEMA的TGA图
已经有3人回复
- synthetic metals 投稿，审稿意见， 请各位帮忙分析一下！
已经有6人回复
- 请帮忙分析一下，谢谢
已经有13人回复
- 【求助】帮忙分析下I-V曲线
已经有26人回复
- 【求助】请高手帮忙分析一下这张固化DSC曲线图，非常感谢
已经有18人回复
- 【求助】帮忙比较一下几种化合物氧化性强弱关系，非常感谢！
已经有3人回复
- 【求助】看不懂文章极图分析，请帮忙解释一下！(图片已能显示)
已经有12人回复
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4334.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-03 19:05:04
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-03 19:05:04
yuzhiming
捐助贵宾 (知名作家)
- MolEPI: 2
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 18071.4
- 散金: 4225
- 红花: 10
- 帖子: 7776
- 在线: 1218.1小时
- 虫号: 48471
- 注册: 2004-06-19
- 性别: GG
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ayouyiyi: 金币+10, ★有帮助 2014-08-02 15:53:50
感谢参与，应助指数 +1
ayouyiyi: 金币+10, ★有帮助 2014-08-02 15:53:50
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4334.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-02 17:29:20
ayouyiyi: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-08-02 20:14:42
感谢参与，应助指数 +1
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-02 17:29:20
ayouyiyi: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-08-02 20:14:42
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4334.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-03 19:05:16
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-03 19:05:16
送红花一朵【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-04 14:13:28
ayouyiyi: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-05 09:39:20
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-04 14:13:28
ayouyiyi: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-05 09:39:20