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想个用户名

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-23 20:29:07
ayouyiyi: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-08-24 10:56:56
片段浓度很低了,切胶一回收这样几乎浓度是不够的。还有,注意到你的空载泳动速度是比你的酶切后的要慢,这是不太正常的,虽然我之前也遇到过,但是问了很多人都说接着连接吧,但我之前的28a的载体一直没有构出来,后来还是果断换了载体,折腾不起
21楼2014-08-23 11:26:47
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 想个用户名 at 2014-08-23 11:26:47
片段浓度很低了,切胶一回收这样几乎浓度是不够的。还有,注意到你的空载泳动速度是比你的酶切后的要慢,这是不太正常的,虽然我之前也遇到过,但是问了很多人都说接着连接吧,但我之前的28a的载体一直没有构出来, ...

嗯,您说的正是,我一直都想知道为何,难得是空载28a的构想原因? 准备换载体了,怎么做都搞不定。。。您现在用的是什么载体啊,现在成功了吗,谢谢~~
22楼2014-08-24 10:56:49
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想个用户名

新虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by ayouyiyi at 2014-08-24 10:56:49
嗯,您说的正是,我一直都想知道为何,难得是空载28a的构想原因? 准备换载体了,怎么做都搞不定。。。您现在用的是什么载体啊,现在成功了吗,谢谢~~...

嗯,换的全式金的一个商品化的蛋白表达载体pEASY-E2,也是是带his标签的,那个很容易构建的
23楼2014-08-24 15:32:58
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
23楼: Originally posted by 想个用户名 at 2014-08-24 15:32:58
嗯,换的全式金的一个商品化的蛋白表达载体pEASY-E2,也是是带his标签的,那个很容易构建的...

哦哦,好,了解了~
24楼2014-08-24 20:09:07
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永远一片天

新虫 (正式写手)

不知道楼主PCR阳性后有没有进行测序验证,我们构建质粒后一般都拿去做个测序,比对确认是正确的目的带后才进行摇菌,提取质粒,如果仅仅简单的PCR阳性,很难说明构建成功,PCR灵敏度高,难免会污染。。
25楼2014-10-17 09:14:23
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