24小时热门版块排行榜    

查看: 2259  |  回复: 24

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-08-04 14:13:47
我的前段时间也是提不出质粒来,师兄说是噬菌体污染。我换了感受态,才做好的。
11楼2014-08-04 09:43:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-08-04 14:13:55
感觉你的样品量太少,用2-3 μg质粒,回收后测浓度。
12楼2014-08-04 12:06:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by llj4212008 at 2014-08-03 22:16:57
PET是表达载体,都是低拷贝的质粒,你测一下浓度,切2ug的量,如果不测的话,你的DNA量加30ul,酶各1ul,切2h,片段切的时候也多切点,然后胶回回收或片段纯化,连接时间1h-过夜都可以,试试看,祝顺利!
...

嗯,谢谢~ 达不到2ug额。。。我这次尽量提高浓度了,正在试
13楼2014-08-04 20:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-04 09:43:27
我的前段时间也是提不出质粒来,师兄说是噬菌体污染。我换了感受态,才做好的。

是吗,那感受态是自己做的还是用试剂盒的啊?
14楼2014-08-04 20:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llj4212008

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by ayouyiyi at 2014-08-04 20:14:15
嗯,谢谢~ 达不到2ug额。。。我这次尽量提高浓度了,正在试...

最少1ug,祝你成功!

[ 发自小木虫客户端 ]
15楼2014-08-05 06:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by llj4212008 at 2014-08-05 06:45:45
最少1ug,祝你成功!
...

嗯,谢谢~
16楼2014-08-05 09:35:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-23 20:28:46
你的胶图跑得很漂亮!
目的基因 你设计的酶切位点引物没问题吧?
目的基因我们一般是做PCR,200ul,分装4管扩,然后胶回收。酶切后再检测。
载体浓度不能太低,酶切后检测。
两者都确保有了,看亮度推测浓度,按照合适的比例加,连接。
载体的量高了就容易空连。
祝你好运!
17楼2014-08-05 14:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by ayouyiyi at 2014-08-04 20:14:50
是吗,那感受态是自己做的还是用试剂盒的啊?...

我们实验室感受态是自己做的。   我热击没做出来,换的电转做出来的。
18楼2014-08-05 15:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by happydove at 2014-08-05 14:34:31
你的胶图跑得很漂亮!
目的基因 你设计的酶切位点引物没问题吧?
目的基因我们一般是做PCR,200ul,分装4管扩,然后胶回收。酶切后再检测。
载体浓度不能太低,酶切后检测。
两者都确保有了,看亮度推测浓度,按 ...

嗯,谢谢,我这次提高浓度了,希望可以成功~
19楼2014-08-06 10:21:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-05 15:37:20
我们实验室感受态是自己做的。   我热击没做出来,换的电转做出来的。...

嗯,热击没做出来可能是感受态的原因,话说我们以前做敲除的时候就是用电击,的确电击效率不错
20楼2014-08-06 10:22:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ayouyiyi 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 成果系统访问量大,请15分钟后再尝试。由此给您造成的不便,敬请谅解。 +6 xhuama 2026-03-02 7/350 2026-03-02 21:23 by kingkocxr
[考研] 295求调剂。一志愿报考郑州大学化学工艺学硕,总分295分 +8 yl1 2026-03-02 9/450 2026-03-02 21:21 by sunny81
[考研] 0856调剂 +9 刘梦微 2026-02-28 9/450 2026-03-02 21:01 by 利好利好.
[考研] 276求调剂 +5 路lyh123 2026-02-28 6/300 2026-03-02 20:35 by hypershenger
[考研] 0856材料调剂 +5 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:31 by hypershenger
[考研] 中国科学技术大学材料与化工281求调剂,有科研和获奖经历 +5 wsxw 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:12 by hypershenger
[考研] 材料类考研调剂 +3 gemmgemm 2026-03-01 4/200 2026-03-02 20:02 by hypershenger
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +4 gaoxiaoniuma 2026-02-28 5/250 2026-03-02 19:33 by Xinyuu
[考研] 化工京区271求调剂 +6 11ing 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:52 by caszguilin
[考研] 290求调剂 +6 ErMiao1020 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:14 by lature00
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[考研] 材料学硕318求调剂 +14 February_Feb 2026-03-01 16/800 2026-03-02 11:17 by yuchj
[考研] 264求调剂 +4 巴拉巴拉根556 2026-02-28 4/200 2026-03-02 10:48 by yuchj
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见