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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请帮忙分析一下，非常感谢~
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-08-04 14:13:47
我的前段时间也是提不出质粒来，师兄说是噬菌体污染。我换了感受态，才做好的。
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11楼2014-08-04 09:43:27
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-08-04 14:13:55
感觉你的样品量太少，用2-3 μg质粒，回收后测浓度。
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12楼2014-08-04 12:06:26
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by llj4212008 at 2014-08-03 22:16:57
PET是表达载体，都是低拷贝的质粒，你测一下浓度，切2ug的量，如果不测的话，你的DNA量加30ul，酶各1ul，切2h，片段切的时候也多切点，然后胶回回收或片段纯化，连接时间1h-过夜都可以，试试看，祝顺利！
...

嗯，谢谢~ 达不到2ug额。。。我这次尽量提高浓度了，正在试
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13楼2014-08-04 20:14:15
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-04 09:43:27
我的前段时间也是提不出质粒来，师兄说是噬菌体污染。我换了感受态，才做好的。

是吗，那感受态是自己做的还是用试剂盒的啊？
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14楼2014-08-04 20:14:50
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llj4212008

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by ayouyiyi at 2014-08-04 20:14:15
嗯，谢谢~ 达不到2ug额。。。我这次尽量提高浓度了，正在试...

最少1ug，祝你成功！

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15楼2014-08-05 06:45:45
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by llj4212008 at 2014-08-05 06:45:45
最少1ug，祝你成功！
...

嗯，谢谢~
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16楼2014-08-05 09:35:43
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-23 20:28:46
你的胶图跑得很漂亮！
目的基因 你设计的酶切位点引物没问题吧？
目的基因我们一般是做PCR，200ul，分装4管扩，然后胶回收。酶切后再检测。
载体浓度不能太低，酶切后检测。
两者都确保有了，看亮度推测浓度，按照合适的比例加，连接。
载体的量高了就容易空连。
祝你好运！
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17楼2014-08-05 14:34:31
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by ayouyiyi at 2014-08-04 20:14:50
是吗，那感受态是自己做的还是用试剂盒的啊？...

我们实验室感受态是自己做的。   我热击没做出来，换的电转做出来的。
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18楼2014-08-05 15:37:20
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by happydove at 2014-08-05 14:34:31
你的胶图跑得很漂亮！
目的基因 你设计的酶切位点引物没问题吧？
目的基因我们一般是做PCR，200ul，分装4管扩，然后胶回收。酶切后再检测。
载体浓度不能太低，酶切后检测。
两者都确保有了，看亮度推测浓度，按 ...

嗯，谢谢，我这次提高浓度了，希望可以成功~
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19楼2014-08-06 10:21:32
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-05 15:37:20
我们实验室感受态是自己做的。   我热击没做出来，换的电转做出来的。...

嗯，热击没做出来可能是感受态的原因，话说我们以前做敲除的时候就是用电击，的确电击效率不错
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20楼2014-08-06 10:22:42
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