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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-08-04 14:13:47
我的前段时间也是提不出质粒来,师兄说是噬菌体污染。我换了感受态,才做好的。
11楼2014-08-04 09:43:27
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-08-04 14:13:55
感觉你的样品量太少,用2-3 μg质粒,回收后测浓度。
12楼2014-08-04 12:06:26
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by llj4212008 at 2014-08-03 22:16:57
PET是表达载体,都是低拷贝的质粒,你测一下浓度,切2ug的量,如果不测的话,你的DNA量加30ul,酶各1ul,切2h,片段切的时候也多切点,然后胶回回收或片段纯化,连接时间1h-过夜都可以,试试看,祝顺利!
...

嗯,谢谢~ 达不到2ug额。。。我这次尽量提高浓度了,正在试
13楼2014-08-04 20:14:15
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-04 09:43:27
我的前段时间也是提不出质粒来,师兄说是噬菌体污染。我换了感受态,才做好的。

是吗,那感受态是自己做的还是用试剂盒的啊?
14楼2014-08-04 20:14:50
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llj4212008

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by ayouyiyi at 2014-08-04 20:14:15
嗯,谢谢~ 达不到2ug额。。。我这次尽量提高浓度了,正在试...

最少1ug,祝你成功!

[ 发自小木虫客户端 ]
15楼2014-08-05 06:45:45
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by llj4212008 at 2014-08-05 06:45:45
最少1ug,祝你成功!
...

嗯,谢谢~
16楼2014-08-05 09:35:43
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
ayouyiyi(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-23 20:28:46
你的胶图跑得很漂亮!
目的基因 你设计的酶切位点引物没问题吧?
目的基因我们一般是做PCR,200ul,分装4管扩,然后胶回收。酶切后再检测。
载体浓度不能太低,酶切后检测。
两者都确保有了,看亮度推测浓度,按照合适的比例加,连接。
载体的量高了就容易空连。
祝你好运!
17楼2014-08-05 14:34:31
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by ayouyiyi at 2014-08-04 20:14:50
是吗,那感受态是自己做的还是用试剂盒的啊?...

我们实验室感受态是自己做的。   我热击没做出来,换的电转做出来的。
18楼2014-08-05 15:37:20
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by happydove at 2014-08-05 14:34:31
你的胶图跑得很漂亮!
目的基因 你设计的酶切位点引物没问题吧?
目的基因我们一般是做PCR,200ul,分装4管扩,然后胶回收。酶切后再检测。
载体浓度不能太低,酶切后检测。
两者都确保有了,看亮度推测浓度,按 ...

嗯,谢谢,我这次提高浓度了,希望可以成功~
19楼2014-08-06 10:21:32
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ayouyiyi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-05 15:37:20
我们实验室感受态是自己做的。   我热击没做出来,换的电转做出来的。...

嗯,热击没做出来可能是感受态的原因,话说我们以前做敲除的时候就是用电击,的确电击效率不错
20楼2014-08-06 10:22:42
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