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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 纤维素酶的纯化
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鲨鱼999

木虫 (小有名气)

[求助] 纤维素酶的纯化 已有2人参与

请问各位大神，纤维素酶透析后，用考马斯亮蓝测蛋白质含量时，空白的OD值为0.3以上，正常吗？标曲最大值是0.5，整个标曲的区间只有2，会太小了吗？
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1楼 2014-07-25 19:57:18
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-01 09:17:43
鲨鱼999: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-08-01 21:31:17
你试着做标准曲线，保证相关系数达到0.995，看看它的测定区间有多大。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2014-07-26 13:57:55
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鲨鱼999

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-07-26 13:57:55
你试着做标准曲线，保证相关系数达到0.995，看看它的测定区间有多大。

标曲的区间是0.33到0.79，相关系数是0.997，点的是100ul 的酶标板。
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3楼2014-07-31 14:16:59
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chenjiong1119

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-01 09:17:58
鲨鱼999: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-08-01 21:31:41
空白OD值高啊，标准曲线的最高点的OD值低啊，标准曲线再浓一点吧，空白很高。
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4楼2014-07-31 20:09:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鲨鱼999 at 2014-07-31 14:16:59
标曲的区间是0.33到0.79，相关系数是0.997，点的是100ul 的酶标板。...

相关系数挺好，但是上限没有达到0.995，理论上超出标曲上限和下限的读数都不能用标曲来计算的。
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5楼2014-07-31 20:25:36
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鲨鱼999

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenjiong1119 at 2014-07-31 20:09:44
空白OD值高啊，标准曲线的最高点的OD值低啊，标准曲线再浓一点吧，空白很高。

浓度增大，OD值就超过1了，准确度就下降了啊！！！！！！
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6楼2014-08-01 21:33:38
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鲨鱼999

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-07-31 20:25:36
相关系数挺好，但是上限没有达到0.995，理论上超出标曲上限和下限的读数都不能用标曲来计算的。...

就是标曲的浓度还可以增大是吗？
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7楼2014-08-01 22:08:35
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
7楼: Originally posted by 鲨鱼999 at 2014-08-01 22:08:35
就是标曲的浓度还可以增大是吗？...

只要你的相关系数足够漂亮，就肯定准确了。打个比方：一把尺子量程为1米，你就可以用它来测1米以内长度的东西，但你现在可能只是用来测0.5米长度的而已。
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8楼2014-08-01 22:11:01
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鲨鱼999

木虫 (小有名气)
如果点板点的是150ul的话、就能达到0.9、但是起点好高、达到0.6了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2014-08-02 09:18:42
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鲨鱼999

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-08-01 22:11:01
只要你的相关系数足够漂亮，就肯定准确了。打个比方：一把尺子量程为1米，你就可以用它来测1米以内长度的东西，但你现在可能只是用来测0.5米长度的而已。...

大神，我想问问你，你做过双水相吗？我现在正在做，但是提取出来的酶没有酶活，怎么办？
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10楼2014-08-03 15:47:09
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