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//Caballero

铁虫 (著名写手)

[求助] 刚入门,第一次做pcr。这是什么情况? 已有4人参与

如图。

刚入门,第一次做pcr。这是什么情况?
20140715-1mt.jpg


刚入门,第一次做pcr。这是什么情况?-1
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//Caballero

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jingrong978 at 2014-07-18 08:44:08
就是PCR失败了,都是引物二聚体。而且你的Marker条带跑的也不是很好,估计电泳操作有待提高。

是电泳的问题吗?还是配体系,往体系中加基因的问题?为什么第二张图上第一行的引物二聚体比第二行亮那么多?
3楼2014-07-18 08:57:58
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by //Caballero at 2014-07-18 15:18:53
谢谢,虽然我还不懂。。...

慢慢积累经验   加油
16楼2014-07-18 22:13:42
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by //Caballero at 2014-07-18 08:57:58
是电泳的问题吗?还是配体系,往体系中加基因的问题?为什么第二张图上第一行的引物二聚体比第二行亮那么多?...

1.都是引物二聚体 2. 你的TAE该换了 3.电压小点 100足够
生命不息奋斗不止
17楼2014-07-19 02:20:05
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古木宁天

铜虫 (初入文坛)

胶孔里很亮的应该是蛋白,你样品处理的不够干净。
18楼2014-07-19 14:26:30
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alicelchf

木虫 (著名写手)

控制好你的模板 引物浓度
修身、齐家、治国、平天下
19楼2014-07-20 16:58:35
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普通回帖

jingrong978

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
//Caballero(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-18 15:32:17
就是PCR失败了,都是引物二聚体。而且你的Marker条带跑的也不是很好,估计电泳操作有待提高。
攻读海洋石油降解菌研究
2楼2014-07-18 08:44:08
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胶孔太亮,里面有什么东西?
拍照聚焦不好。
4楼2014-07-18 09:04:48
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
//Caballero(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:21:48
1、看上去是用genomic DNA进行PCR,而且用量不小;
2、图中主要为引物二聚体,偶有几个有产物(两条带)不知道是否为你所要的(大小)?
3、主要原因估计是annealing温度不合适(太低),可以考虑做一个gradient PCR to determine the optimal annealing temperature. 同时看看你引物中GC比例是不是很高?
5楼2014-07-18 09:27:15
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
//Caballero: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-07-18 10:42:17
1、胶制的不好,所以marker跑得不好
2、PCR结果几乎都是引物二聚体,再看看几个孔里有时出现两条带,一个原因可能是退火温度低,另一个可能是引物设计得不好,建议先提高退火温度试试,若还是两条带那就是引物的问题。
3、P这么多才P出几个,很可能你的操作方法还有待改善
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
6楼2014-07-18 10:26:17
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//Caballero

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-18 09:27:15
1、看上去是用genomic DNA进行PCR,而且用量不小;
2、图中主要为引物二聚体,偶有几个有产物(两条带)不知道是否为你所要的(大小)?
3、主要原因估计是annealing温度不合适(太低),可以考虑做一个gradient PC ...

因为是帮师姐做的,她之前做的很好。是我操作的问题,不知道哪个步骤做的不好。。
7楼2014-07-18 10:40:36
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//Caballero

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-07-18 10:26:17
1、胶制的不好,所以marker跑得不好
2、PCR结果几乎都是引物二聚体,再看看几个孔里有时出现两条带,一个原因可能是退火温度低,另一个可能是引物设计得不好,建议先提高退火温度试试,若还是两条带那就是引物的问 ...

谢谢,就是不知道哪些操作有问题
8楼2014-07-18 10:42:39
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

慢慢来,可以做个梯度PCR试试。
9楼2014-07-18 15:04:30
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//Caballero

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-07-18 15:04:30
慢慢来,可以做个梯度PCR试试。

谢谢,虽然我还不懂。。
10楼2014-07-18 15:18:53
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