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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 刚入门，第一次做pcr。这是什么情况？
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//Caballero

铁虫 (著名写手)

[求助] 刚入门，第一次做pcr。这是什么情况？ 已有4人参与

如图。

刚入门，第一次做pcr。这是什么情况？
20140715-1mt.jpg


刚入门，第一次做pcr。这是什么情况？-1
20140717.widetype1.jpg
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1楼 2014-07-18 08:34:59
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
//Caballero(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:21:48
1、看上去是用genomic DNA进行PCR，而且用量不小；
2、图中主要为引物二聚体，偶有几个有产物（两条带）不知道是否为你所要的（大小）?
3、主要原因估计是annealing温度不合适（太低）,可以考虑做一个gradient PCR to determine the optimal annealing temperature. 同时看看你引物中GC比例是不是很高？
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5楼2014-07-18 09:27:15
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jingrong978

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
//Caballero(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-18 15:32:17
就是PCR失败了，都是引物二聚体。而且你的Marker条带跑的也不是很好，估计电泳操作有待提高。
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攻读海洋石油降解菌研究
2楼2014-07-18 08:44:08
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//Caballero

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jingrong978 at 2014-07-18 08:44:08
就是PCR失败了，都是引物二聚体。而且你的Marker条带跑的也不是很好，估计电泳操作有待提高。

是电泳的问题吗？还是配体系，往体系中加基因的问题？为什么第二张图上第一行的引物二聚体比第二行亮那么多？
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3楼2014-07-18 08:57:58
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶孔太亮，里面有什么东西？
拍照聚焦不好。
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4楼2014-07-18 09:04:48
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