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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重金求助荧光定量扩增曲线不呈S型，呈直线型，是什么原因？
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biofind

新虫 (小有名气)

[求助] 重金求助荧光定量扩增曲线不呈S型，呈直线型，是什么原因？ 已有4人参与

我做染料法荧光定量RT-PCR。标准品没问题，曲线都呈S型。但是我的未知病毒样品结果不是S型，反而是直线型（熔解曲线没问题和标准品的一样）。
请问这是什么原因，这种扩增曲线是直线的，似乎达不到平台期的，结果可不可靠？

重金求助荧光定量扩增曲线不呈S型，呈直线型，是什么原因？
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1楼 2014-07-11 16:58:28
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sdutan

新虫 (初入文坛)
送你四个大字：“引物不行！”
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2楼2014-07-12 06:37:05
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biofind

新虫 (小有名气)
是这个原因吗？那我扩增标准品的曲线一点没问题
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3楼2014-07-12 14:13:57
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violetice

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
biofind(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-12 16:47:57
你的样本是什么？是不是核酸提取过程中样本中的某些抑制成分没有去除干净啊？把核酸再纯化下试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-07-12 16:23:16
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biofind

新虫 (小有名气)
样本是转染质粒，拯救病毒用的。因此里面含有病毒RNA和转染质粒。
我先用DNA酶处理了，然后提RNA，做反转录，然后做qRT-PCR
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5楼2014-07-14 07:50:30
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爱上鱼……

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
核酸不纯吧……把核酸提纯了做看看
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懒病又犯了……
6楼2014-07-14 10:54:54
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
biofind(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-14 18:23:34
不清楚，但是阈值应该下调到典型对数曲线的位置。
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7楼2014-07-14 14:08:10
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biofind

新虫 (小有名气)
核酸不纯是什么意思？
我的样品里含有RNA和质粒DNA，我用DNase酶处理了质粒DNA，剩余的不就是RNA了吗？然后，我做的反转录和荧光定量PCR
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8楼2014-07-14 16:23:49
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

跑的几个重复都是这样么？ 多跑几个重复是不是这样呢？
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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
9楼2014-07-20 20:40:35
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