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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 纯化蛋白混一起分析两个蛋白形成的二聚体活性，可行吗
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sunlifang

木虫 (正式写手)

[求助] 纯化蛋白混一起分析两个蛋白形成的二聚体活性，可行吗 已有1人参与

如题，我想想看下两个蛋白之间会不会以二聚体的形式表现活性，可以直接将纯化后的蛋白混一起后分析活性吗？若这样可以混合比例有要求吗？如若能提供相关文献更好，谢谢
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1楼 2014-07-07 12:28:38
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-07 15:24:23
sunlifang: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-07 15:49:09
尽量以1:1的比例混合，盐浓度要低一些，50-150 mM NaCl, 然后过分子筛，如果形成混合物，那么就和单体分开了，然后再做下面的实验。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-07-07 15:11:51
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sunlifang

木虫 (正式写手)
内容已删除
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3楼2014-07-07 15:51:10
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sunlifang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 15:11:51
尽量以1:1的比例混合，盐浓度要低一些，50-150 mM NaCl, 然后过分子筛，如果形成混合物，那么就和单体分开了，然后再做下面的实验。

我做的构建带的HIS标签，蛋白纯化最后用的是加500mM的PBS buffer洗脱的，你的意思是混合时加入50-150 mM NaCl溶液还是？盐溶液怎么用？谢谢
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4楼2014-07-07 16:05:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
两个蛋白都可以透析至盐浓度等价于100mM, 然后按摩尔比1:1混合，浓缩后过分子筛，如果形成复合物，则复合物先洗出，然后是单体。
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2014-07-07 16:26:04
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sunlifang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 16:26:04
两个蛋白都可以透析至盐浓度等价于100mM, 然后按摩尔比1:1混合，浓缩后过分子筛，如果形成复合物，则复合物先洗出，然后是单体。

纯化完再透析？透析的时间是不是也挺长的，我怕我的蛋白活性会受影响，若我直接按1：1混合然后接着作反应可以吗？
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6楼2014-07-07 16:41:18
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
那你怎么知道形成了复合物？
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7楼2014-07-07 18:04:45
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sunlifang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 18:04:45
那你怎么知道形成了复合物？

我这两个蛋白没表现出预期的活性（蛋白本身有活性），就是想看看二聚体会不会有预期的活性，如果没有就没有必要再看是否形成复合物了。。。谢谢你哈
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8楼2014-07-07 18:25:01
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sunlifang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 18:04:45
那你怎么知道形成了复合物？

你好我再问下，二者混合后还需要放置一段时间吗？冰上？
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9楼2014-07-07 19:13:15
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by sunlifang at 2014-07-07 19:13:15
你好我再问下，二者混合后还需要放置一段时间吗？冰上？...

冰上应该是OK的，低温操作永远是对的
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sunlifang
行至水穷处，坐看云起时
10楼2014-07-07 20:11:56
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