24小时热门版块排行榜    

查看: 1550  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sunlifang

木虫 (正式写手)

[求助] 纯化蛋白混一起分析两个蛋白形成的二聚体活性,可行吗 已有1人参与

如题,我想想看下两个蛋白之间会不会以二聚体的形式表现活性,可以直接将纯化后的蛋白混一起后分析活性吗?若这样可以混合比例有要求吗?如若能提供相关文献更好,谢谢
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

两个蛋白都可以透析至盐浓度等价于100mM, 然后按摩尔比1:1混合,浓缩后过分子筛,如果形成复合物,则复合物先洗出,然后是单体。
行至水穷处,坐看云起时
5楼2014-07-07 16:26:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-07 15:24:23
sunlifang: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-07 15:49:09
尽量以1:1的比例混合,盐浓度要低一些,50-150 mM NaCl, 然后过分子筛,如果形成混合物,那么就和单体分开了,然后再做下面的实验。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-07-07 15:11:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunlifang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 15:11:51
尽量以1:1的比例混合,盐浓度要低一些,50-150 mM NaCl, 然后过分子筛,如果形成混合物,那么就和单体分开了,然后再做下面的实验。

我做的构建带的HIS标签,蛋白纯化最后用的是加500mM的PBS buffer洗脱的,你的意思是混合时加入50-150 mM NaCl溶液还是?盐溶液怎么用?谢谢
4楼2014-07-07 16:05:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunlifang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-07 16:26:04
两个蛋白都可以透析至盐浓度等价于100mM, 然后按摩尔比1:1混合,浓缩后过分子筛,如果形成复合物,则复合物先洗出,然后是单体。

纯化完再透析?透析的时间是不是也挺长的,我怕我的蛋白活性会受影响,若我直接按1:1混合然后接着作反应可以吗?
6楼2014-07-07 16:41:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 19/950 2026-08-12 10:55 by 要乐观耀哥
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +5 Tide man 2026-08-11 5/250 2026-08-12 09:24 by kangban
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见